- 商品詳情
- 售后服務
- 相關文獻
-
BY4741 Chemically Competent Cell100μl/支¥ 1580100 個
BY4741 Competent Cell: 100μl/支 保存: -80℃(3個月)
pYES2 (control vector, 10 ng/μl) 10μl 保存:-80℃(12個月)
Carrier DNA (10 μg/μl) 100μl 保存:-20℃(12個月)
PEG/LiAC: 5ml 保存: 4℃(12個月)
基因型
MATa his3Δ1 leu2 met15Δ ura3-52
BY4741 Chemically Competent Cell產(chǎn)品說明
BY4741菌株來源于釀酒酵母原始菌株——S288C,是實驗室的常用菌株,為配子MATa型,廣泛應用于鈉,鉀離子平衡;細胞抗鹽;各種金屬離子的吸收;重金屬毒性;各種糖類,碳源對真核生物細胞生長的影響;過氧化物,超氧化物的吸收與運輸?shù)难芯恐。BY4741釀酒酵母為組氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸 、尿嘧啶缺陷型菌株,可直接通過PEG/LiAc將pYES2質粒轉化進入BY4741細胞內。質粒pYES2的篩選標志為URA,可用SD-URA板板進行篩選。生產(chǎn)的BY4741感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作,-80℃可保存三個月,pYES2質粒檢測轉化效率>103 cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取100 µl冰上融化的BY4741感受態(tài)細胞,依次加入預冷的目的質粒1-3 µg,Carrier DNA (96℃水浴3 min,快速冰浴
3 min,重復一次) 10 µl,PEG/LiAc 500 µl并吸打幾次混勻,30℃水浴30 min (15 min時翻轉6-8次混勻)。
2. 將感受態(tài)移到42℃水浴15 min (7.5 min時翻轉6-8次混勻)。
3. 5000 rpm離心 40 s棄上清,ddH2O 400 µl 重懸,離心 30s棄上清。
4. ddH2O 50 µl重懸,涂板,29℃培養(yǎng)48-96 h。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞在冰上融化。
2. 若使用pYES2質粒表達蛋白,需在培養(yǎng)基中加入2%的半乳糖(篩選培養(yǎng)基中不用加半乳糖;當需要目的蛋白表達時,需加入半乳糖代替葡萄糖作為碳源),以誘導目的基因的表達。
3. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。
4. 同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。
5. 酵母為真核生物,不易長期保存,隨感受態(tài)在-80℃保存時間的延長,轉化效率會不斷下降,建議保存時間不超過90天。
6. BY4741酵母菌株對高溫敏感,適生長溫度為27-30℃;高于31℃,生長速度和轉化效率呈指數(shù)下降。
7. 酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢,培養(yǎng)基中缺陷成分越多,生長越慢,以轉化涂板為例:涂YPDA平板29℃,48 h培養(yǎng)可見直徑1 mm克;涂SD單缺平板29℃,48-60 h培養(yǎng)可見直徑1 mm克隆,涂SD雙缺平板29℃,60-80 h培養(yǎng)可見直徑1 mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培養(yǎng)可見直徑1 mm克隆。
試驗前請仔細閱讀說明書,本產(chǎn)品僅供科研實驗使用。
1. 所購產(chǎn)品均質量保證!
2. 試劑盒方面提供技術指導,Elisa試劑盒還可以提供代檢測服務。
3.本公司出售的任何產(chǎn)品均保質保量,除以下情況,客戶可聯(lián)系我公司申請退換貨售后服務
以下情況不予辦理退換貨:
1、已超過受理期限的產(chǎn)品,如過保質期。
2、由于客戶自身操作原因導致實驗失敗。
3、由于客戶沒有仔細確認要訂購的指標,導致自己的指標定錯。
4、產(chǎn)品已使用(質量問題除外)。
文獻名稱