Tuner（DE3）Chemically Competent Cell

產(chǎn)品編號：G100025
產(chǎn)品類別：質(zhì)粒菌種感受態(tài)
檢測樣本：細菌

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100μl/支

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Tuner(DE3)： 100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl

保存條件(保質(zhì)期)： -80℃（6個月）

基因型

F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm lacY1 (DE3)

Tuner(DE3)Chemically Competent Cell

產(chǎn)品說明

Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因 (半乳糖苷透性酶基因)突變株，此突變導致IPTG以均一速度進入體系中大腸桿菌的每個細胞，產(chǎn)生更加嚴格、均一的濃度依賴。此菌株用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體 (如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區(qū)整合于Tuner的染色體上，所以稱為Tuner(DE3)，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。Tuner(DE3)感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達10⁷cfu/μg DNA。

操作方法

1.Tuner(DE3)感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物）并用手打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。