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ER2566 Chemically Competent Cell100μl/支￥ 1080100 個(gè)
ER2566： 100μl/支
pUC19 (control vector，10pg/μl): 10μl
保存條件(保質(zhì)期)： -80℃（6個(gè)月）
基因型
F- λ- fhuA2 [lon] ompT lacZ::T7 gene1 gal sulA11 Δ(mcrC-mrr)114::IS10 R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb-210::Tn10)(TetS) endA1 [dcm]
ER2566 Chemically Competent Cell
產(chǎn)品說明
ER2566菌株是NEB公司開發(fā)的具有超高轉(zhuǎn)化效率的蛋白表達(dá)原核菌株，來源于BL21。Lac啟動(dòng)子啟動(dòng)下游T7RNA聚合酶的表達(dá)，可用于T7啟動(dòng)子表達(dá)載體(如pET系列)的高水平蛋白表達(dá)。fhuA2賦予ER2566菌株對(duì)噬菌體T1的抗性。同時(shí)ER2566為lon 和 ompT蛋白酶缺陷菌株。Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺失能夠有效抑制表達(dá)的異源蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的降解，Δ(mcrC-mrr)114，mcr-73突變的存在使ER2566菌株無法對(duì)外源DNA進(jìn)行標(biāo)記、限制，提高了外源甲基化DNA的轉(zhuǎn)化效率。ER2566感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)109 cfu/μg DNA。
操作方法
1.ER2566感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
試驗(yàn)前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書，本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)使用。
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文獻(xiàn)名稱
