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cStar(DE3) Chemically Competent Cell

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                        BL21 Star(DE3):                                        100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

基因型

FompT hsdSB(rBmBgal dcm rne131 (DE3)

BL21 Star(DE3) Chemically Competent Cell

產(chǎn)品說(shuō)明

BL21 Star(DE3)菌株源于BL21(DE3)菌株,含有rne131突變(RNaseE基因),RNaseE基因的突變降低了內(nèi)源RNase的積累,增強(qiáng)菌株細(xì)胞內(nèi)mRNA的穩(wěn)定性,從而提高異源蛋白的表達(dá)水平。主要適用于T7啟動(dòng)子表達(dá)載體(如pET系列)的高水平蛋白表達(dá),同時(shí)含有大腸桿菌RNA聚合酶,也可用于非T7啟動(dòng)子表達(dá)載體(pGEX,pMAL等)的蛋白表達(dá)。由于BL21 Star(DE3)菌株的異源基因基礎(chǔ)表達(dá)水平較高,所以不適合毒性蛋白的表達(dá)。BL21 Star(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)108cfu/μg DNA。

 

操作方法

1.  BL21 Star(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì);蜻B接產(chǎn)物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2.  42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.  5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

 

5.  將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

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