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NoveBlue(DE3) Chemically Competent Cell

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                     NovaBlue(DE3):                                        100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                    10μl

基因型

F`proA+B+ lacIZΔM15::Tn10 (TetR)] endA1 hsdR17(rk12-,mk12+) supE44 thi -1 recA1 gyrA96 relA1 lac(DE3)

 

NoveBlue(DE3) Chemically Competent Cell

產(chǎn)品說明

NovaBlue(DE3)來源于K12菌株,具有*的轉(zhuǎn)化效率,是轉(zhuǎn)化效率高的原核表達(dá)菌株,可同時(shí)用于普通質(zhì)粒的構(gòu)建和蛋白的原核表達(dá)。NovaBlue(DE3)菌株染色體DNA中整合了λ噬菌體DE3區(qū),使得NovaBlue(DE3)菌株可同時(shí)表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶,廣泛用于pET系列,pGEX,pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。NovaBlue(DE3)菌株具有四環(huán)素抗性,endA1和recA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提。lacZΔM15的存在使NovaBlue(DE3)可用于藍(lán)、白斑篩選。生產(chǎn)的NovaBlue(DE3)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)109cfu/μg DNA。

 

操作方法

1. NovaBlue(DE3)感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì);蜻B接產(chǎn)物)并用手打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上(若質(zhì)粒濃度較高,也可稀釋后涂板,務(wù)必保證能在平板上挑到單克隆菌落)。

 

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

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