培養(yǎng)條件：
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | ||
| 傳代方法 | 1:3-1:6 | 傳代情況 | 每2-3天換液一次 |
| 備注 | 此AML12（α小鼠肝臟12）細胞系由來自針對人TGFα的轉(zhuǎn)基因小鼠（CD1菌株，品系MT42）的肝細胞建立。通過電子顯微鏡觀察，這些細胞表現(xiàn)出典型的肝細胞特征，例如過氧化物酶體和膽小管樣結(jié)構(gòu)。AML12細胞保留表達血清（白蛋白，α1抗胰蛋白酶和轉(zhuǎn)鐵蛋白）和間隙連接（連接蛋白26和32）蛋白的高水平mRNA的能力，并且僅含有乳酸脫氫酶的同工酶5。細胞表達高水平的人TGFα和較低水平的小鼠TGFα。肝臟特異性蛋白質(zhì)的表達在培養(yǎng)中隨時間降低，但通過在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞而重新激活。
所供Luciferase 穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株采用慢病毒法構(gòu)建，除穩(wěn)定高效地表達 luciferase 基因外，還具有特異性強、成像質(zhì)量高、發(fā)光強度可精確定量等優(yōu)點，可實現(xiàn)包括啟動子活性研究、哺乳動物細胞雙雜交實驗以及活體動物成像實驗等多方面的靈活應用。 基因報告系統(tǒng)廣泛應用于真核生物基因表達和細胞生理學的研究，是提高實驗準確度的常用方法。熒光素酶（Luciferase）是以熒光素（luciferin）或脂肪醛（firefly aldehyde）為底物來檢測熒光素酶活性的一種常見基因報告系統(tǒng)，因其具有方便快捷、靈敏度強、成功率高等優(yōu)點，在基因表達的研究中得到廣泛應用。 轉(zhuǎn)染方法：慢病毒 抗性：Puro 靶細胞名稱：AML12 靶細胞別名：AML-12; AML 12; Alpha Mouse Liver 12 種屬來源：小鼠 組織來源：肝 疾病特征：— 建議同時購買完培，同時購買非常優(yōu)惠 | ||
細胞收到后處理
培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內(nèi)嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認收到狀態(tài)良好。（換液后將瓶蓋擰松）
細胞培養(yǎng)步驟
a、細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養(yǎng)。
貼壁細胞傳代步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，使之完全脫落后吸出，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL完全培養(yǎng)基重懸。
4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
懸浮細胞傳代步驟日下：
1、半換液法
半換液處理，豎著培養(yǎng)瓶在培養(yǎng)箱靜置1小時左右，輕輕吸掉3ml左右培養(yǎng)基，然后補給3ml的完全培養(yǎng)基，如果培養(yǎng)基變色慢，可直接加500ul左右FBS，傳代的時候可以直接補給5ml培養(yǎng)基 分兩個培養(yǎng)瓶培養(yǎng)，一般這樣傳代3次左右可以離心傳代一次，去掉死細胞。
2、離心換液法
如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
b、細胞凍存：
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；
3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。
4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上再轉(zhuǎn)入液氮罐中。
C、細胞復蘇：
1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項：有些細胞貼壁不牢，在運輸過程中容易發(fā)生細胞脫落，這是正�，F(xiàn)象。如脫離較多可將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml完全培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml完全培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
