氯是人體必需常量元素之一,是維持體液和電解質(zhì)平衡中所必需的,也是胃液的一種必需成分。1.維持體液酸堿平衡;2.氯離子與鈉離子是細(xì)胞外液中維持滲透 壓的主要離子,二者約占總離子數(shù)的80%左右,調(diào)節(jié)與控制著細(xì)胞外液的容量和滲透壓;3.參與血液CO二價(jià)離子運(yùn)輸;4.氯離子還參與胃液中胃酸形成,胃 酸促進(jìn)維生素B12和鐵的吸收;激活唾液淀粉酶分解淀粉,促進(jìn)食物消化;刺激肝臟功能,促使肝中代謝廢物排出;氯還有穩(wěn)定神經(jīng)細(xì)胞膜電位的作用等。
測(cè)定原理:
用硫氰酸汞處理氯離子形成有色絡(luò)合物,其顏色的深度與氯離子濃度成正比。
樣本要求:
1、按常規(guī)檢驗(yàn)要求采集處理樣本, 樣本可以是血清、血漿、腦脊液、組織勻漿、細(xì)胞勻漿及尿液。
2、樣本 2~8℃可穩(wěn)定 3~4 天,-20℃以下可穩(wěn)定數(shù)月。
四、所需儀器及試劑:
可調(diào) 505nm 波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,去離子水,蛋白測(cè)定試劑(動(dòng)物組織或細(xì)胞用,本公司有售)。
五、測(cè)定步驟:
1、前處理:
血清(漿)等液體樣本直接使用(濃度過(guò)高的用去離子水稀釋后再測(cè))。
組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入 9 倍體積的去離子水,冰水浴勻漿,3500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取勻漿上清液待測(cè)。
細(xì)胞類樣本:將收集好的細(xì)胞,用等滲的 PBS 清洗 1~
2 次后,低速(1000-2000 轉(zhuǎn)/分鐘)離心收集細(xì)胞沉淀,再加入 0.3mL 去離子水,冰浴中超聲或手動(dòng)研磨破碎細(xì)胞,3500 轉(zhuǎn)/分鐘,離心 10 分鐘取上清待測(cè)。
注意事項(xiàng):
1、實(shí)驗(yàn)應(yīng)避免氯污染,最好用一次性 96 孔板操作(本公司有售)。
2、制備組織勻漿時(shí),應(yīng)選用去離子水作為勻漿介質(zhì),避免氯污染,切勿用生理鹽水或其它含氯離子的勻漿介質(zhì)。
3、本試劑盒可上全自動(dòng)/半自動(dòng)生化分析儀
4、測(cè)定組織或細(xì)胞中氯離子含量,測(cè)定總蛋白濃度的試劑盒(本公司有售),推薦 總蛋白試劑盒(考馬斯亮藍(lán)法)或 總蛋白試劑盒(BCA 法)。
5、本試劑盒僅用于科研。
6、標(biāo)準(zhǔn)液濃度不同批次有可能會(huì)不同(計(jì)算舉例為固定值),計(jì)算時(shí)按具體標(biāo)記的濃度計(jì)算即可。