ALT為一種參與人體蛋白質(zhì)新陳代謝的酶（相當(dāng)于工業(yè)生產(chǎn)中的催化劑），起加快體內(nèi)蛋白質(zhì)氨基酸在體內(nèi)轉(zhuǎn)化的作用，它廣泛存在于人體各種組織.器官.肌肉.骨骼中，以肝臟細(xì)胞的細(xì)胞漿中最多。當(dāng)人體內(nèi)各組織器官活動(dòng)或病變時(shí)，就會(huì)把其中的ALT釋放到血液中，使血清ALT含量增加。例如，肝臟發(fā)炎時(shí)，轉(zhuǎn)氨酶就會(huì)從肝細(xì)胞釋放到血液中，肝臟有病，血清轉(zhuǎn)氨酶一定增高，當(dāng)肝細(xì)胞千分之一有炎癥時(shí)，血清轉(zhuǎn)氨酶含量就會(huì)增高一倍以上，因此，血清轉(zhuǎn)氨酶數(shù)量是肝臟病變程度的重要指標(biāo)。

測(cè)定原理：

谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）在 37℃及 PH7.4 條件下，作用于丙氨酸及 α-酮戊二酸組成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反應(yīng)30min 后（固定時(shí)間）加入 2,4-二硝基苯肼（DNPH）鹽酸溶液，既中止反應(yīng)，同時(shí) DNPH 與酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在堿性條件下呈紅棕色，于 505nm 比讀吸光度并計(jì)算酶活力。

二、試劑的組成與配制：(試劑盒有效期 6 個(gè)月)

試劑一:谷丙轉(zhuǎn)氨酶基質(zhì)液,5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二:2,4—二硝基苯肼液,5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三:4mol/L 氫氧化鈉液,5mL×1 瓶，室溫密封保存；臨用時(shí)按 4mol/L 氫氧化鈉液:雙蒸水=1∶9 的比例配成0.4mol/L 氫氧化鈉液，需多少配多少，室溫密封保存。

試劑四:2mmol/mL 丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液×1 支，4℃保存；

試劑五:0.1mol/L 磷酸鹽緩沖液×1 支，4℃保存。

三、所需儀器及試劑：

 可調(diào) 505nm 波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，蒸餾水，37℃水浴鍋或恒溫箱，蛋白測(cè)定試劑（組織或細(xì)胞用，本公司有售）。

四、操作過程：

1、樣本前處理:

①、血清（漿）及其它液體樣本待測(cè)：直接測(cè)定。

②、組織樣本：準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(mL)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的生理鹽水,冰水浴條件下勻漿,制成10%的組織勻漿,2500 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,取上清液用生理鹽水稀釋到適宜濃度(通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得勻漿液卡門氏單位值小于 150)待測(cè)。(另取部分上清液測(cè)蛋白濃度,蛋白定量試劑盒本所有售)

③、培養(yǎng)細(xì)胞樣本前處理：將收集好的細(xì)胞用等滲緩沖液（推薦 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水）清洗 1～

2 次；1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,棄上清,留細(xì)胞沉淀，加入勻漿介質(zhì)（推薦加入 0.1mol/L 且 pH7～7.4 的磷酸鹽緩沖液或生理鹽水），冰水浴條件下超聲破碎或手動(dòng)勻漿，制備好的勻漿液不離心，待測(cè)。

 注意點(diǎn)： 1、比色法中常用的有賴氏（Reitman-Frankel）法及金氏（King） 法。賴氏法標(biāo)準(zhǔn)曲線所定單位數(shù)，是用實(shí)驗(yàn)方法和卡門氏分 光光度法（速率法）作對(duì)比測(cè)定求得的。以卡門氏單位報(bào)告 結(jié)果，比較準(zhǔn)確。 卡門氏單位定義：1mL 液體，反應(yīng)液總?cè)萘?3mL，波長(zhǎng) 340nm， 1cm 光徑，25℃，1min 內(nèi)所生成的丙酮酸，使 NADH 氧化 成 NAD+而引起吸光度每下降 0.001 為一個(gè)單位（1 卡門氏 單位=0.482 U/L，25℃）。 2、一般血清標(biāo)本內(nèi)源性酮酸很少，血清對(duì)照孔吸光度值接近試 劑空白孔（可以通過預(yù)試結(jié)果來判定）時(shí)可以雙蒸水代替血 清作對(duì)照孔。所以成批標(biāo)本測(cè)定時(shí)，一般不需要每一標(biāo)本都 作本身血清對(duì)照孔，以試劑空白孔代替即可，但對(duì)脂血、黃 疸或溶血血清，每份標(biāo)本應(yīng)作對(duì)照孔。 3、酶活力超過 150 卡門氏單位時(shí)，用生理鹽水稀釋后重測(cè)。 4、應(yīng)將一般血清的對(duì)照孔（或稱標(biāo)本空白孔）的吸光度作為日 常質(zhì)控的指標(biāo)之一；如相差大，可考慮α-酮戊二酸濃度、DNPH 濃度及儀器等原因引起。 5、血清中 ALT 在室溫（25℃）可保存 2 天，在 0～4℃可保存一 周，在-25℃可保存 1 個(gè)月。