僅供科研使用，不得用于臨床檢驗(yàn)。

 

人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體

(Flu A-H1N1 IgG)定性檢測(cè)試劑盒（ELISA） 說(shuō)明書(shū)

使用前，請(qǐng)務(wù)必仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名稱(chēng)：人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG) 定性檢測(cè)試劑盒（ELISA） 

【包裝規(guī)格】

48 人份/盒，96 人份/盒 

【預(yù)期用途】

僅供科研使用，定性檢測(cè)血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液中人新型甲型H1N1 流感病毒（2009） IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG)

的濃度。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被新型甲型H1N1流感病毒

（2009）抗原的微孔酶標(biāo)板中，加入人新型甲型H1N1流感病毒（2009）IgG抗體(Flu A-H1N1 IgG)陰陽(yáng)性性對(duì)照和待測(cè)樣本，溫育洗滌，再加入另一株 HRP 標(biāo)記的抗人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG抗體（酶標(biāo)抗體），經(jīng)過(guò)溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗-酶標(biāo)抗體的復(fù)合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液（2M硫酸）作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀上測(cè)定吸光度（OD

值），吸光度（OD 值）與待測(cè)樣品中人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG抗體(Flu A-H1N1 IgG)的濃度正相關(guān)，通過(guò)計(jì)算公式判斷樣品陰陽(yáng)性。

【主要組成成分】主要成分

組分	數(shù)量	主要成分
陰性對(duì)照	0.5ml/管	不含待測(cè)物的緩沖液
陽(yáng)性對(duì)照	0.5ml/管	含待測(cè)物的緩沖液
包被微孔板	48T	預(yù)包被固相抗原
HRP 標(biāo)記抗體	3mL	HRP 標(biāo)記的檢測(cè)抗體
樣本稀釋液	3mL	緩沖液

底物液 A	3mL	過(guò)氧化脲工作液
底物液 B	3mL	TMB 工作液
終止液	3mL	硫酸稀釋液
20×濃縮洗滌液	20mL	含 0.15%Tween20 的 PBS
說(shuō)明書(shū)	1 份	--
自封袋	1 個(gè)	--
不干膠	2 片	--

陰陽(yáng)性對(duì)照已經(jīng)通過(guò)測(cè)試，結(jié)果表明 HBs 抗原陰性，HIV1、HIV2 和HCV 抗體陰性，由于不存在一種試驗(yàn)方法能夠完全保證沒(méi)有這些物質(zhì)，本品必須按照具有潛在的感染性進(jìn)行處理，處理過(guò)程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

1、能夠檢測(cè) 450 nm 吸光度的酶標(biāo)儀。

2、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水或去離子水

4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)

5、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、1L 量筒

7、無(wú)粉一次性乳膠手套

8、稀釋用聚丙烯試管

【儲(chǔ)存條件及有效期】

1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期 6 個(gè)月。

2、開(kāi)封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回 2-8℃冰箱。

3、開(kāi)封后，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品、包被微孔板和 HRP 標(biāo)記抗體，有效期為 28 天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。

【適用儀器】

半自動(dòng)的酶標(biāo)儀，如 Thermo MK3，或者國(guó)產(chǎn)酶標(biāo)儀。

【樣本要求】

樣本類(lèi)型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過(guò)程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。1、細(xì)胞培養(yǎng)上清：4000rpm 條件下離心 20min，去除細(xì)胞顆粒和聚合物，上清液保存在-

20℃以下，避免反復(fù)凍融。

2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm 條件下離心 20min，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融。

3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在 4000rpm 條件下，離心 20 分鐘取上清， 血漿保存在-20℃以下，避免反復(fù)凍融。

本保存和穩(wěn)定性

樣本在 2-8℃條件下，可以儲(chǔ)存 72h，或者在- 20℃儲(chǔ)存 6 個(gè)月。樣本收集后，不是一次檢測(cè)完，請(qǐng)按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時(shí)在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍。

【試劑準(zhǔn)備】

1、使用前，所有的組分都要至少?gòu)?fù)溫 30min，確保充分復(fù)溫到室溫。

2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會(huì)有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正�，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按 1:20 稀釋?zhuān)��?/font> 1 份的濃縮洗滌液，添加 19 份的蒸餾水。

3、底物：底物液 A 和 B，在使用前，按 1:1 體積充分混合，混合后 15 分鐘內(nèi)使用。

操作程序

1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。

2、按前面試劑準(zhǔn)備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。

3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。

4、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣本孔加待

測(cè)樣本 50μL，空白孔不加。

5、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL。

6、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

7、揭開(kāi)封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。

8、如此重復(fù) 4 次（共洗板 5 次）。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡 20s 的程序，可以提高檢測(cè)的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。

9、將底物 A 和B 按1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 15min。

10、所有孔加入終止液 50μL，在酶標(biāo)儀上讀取各孔吸光度（OD 值）。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

檢測(cè)完成后，以陰性對(duì)照的 OD+0.25，做為閾值，樣本 OD 值大于閾值，為陽(yáng)性；樣本OD 值低于閾值為陰性。

【檢驗(yàn)方法的局限性】

1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。

2、在試劑盒標(biāo)示的有效期內(nèi)使用，過(guò)期產(chǎn)品不得使用。

3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

5、如果樣本值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線最高濃度，請(qǐng)用檢測(cè)緩沖液稀釋樣本，并重新檢測(cè)。如果細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本需要較大的稀釋倍數(shù)，請(qǐng)用細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行適度稀釋。

6、待測(cè)樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)前，請(qǐng)排除該因素。

7、通過(guò)其他方法得到的檢測(cè)結(jié)果，與本試劑盒測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】1、物理性能

試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無(wú)破損漏氣。

2、陰性結(jié)果

陰性對(duì)照的 OD 值不高于 0.2。3、陽(yáng)性結(jié)果

陽(yáng)性對(duì)照的 OD 值不低于 0.8。4、特異性

本試劑盒識(shí)別天然和重組人新型甲型H1N1 流感病毒（2009）IgG 抗體(Flu A-H1N1 IgG)，與結(jié)構(gòu)類(lèi)似物無(wú)交叉。

5、穩(wěn)定性

2℃-8℃保存，有效期 6 個(gè)月。

【注意事項(xiàng)】生物安全

1、檢測(cè)必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。

2、試劑盒的液體組分中，含有 proclin-300 防腐劑，可能引起皮膚過(guò)敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸。

3、底物液對(duì)皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套，實(shí)驗(yàn)完成后徹底洗手。

4、試劑盒中的終止液為酸性溶液，在使用終止液時(shí)，請(qǐng)佩戴防護(hù)服，及防護(hù)眼睛、手及面部的設(shè)施。

5、本試劑盒用于科學(xué)研究，不能用于診斷治療。

6、請(qǐng)不要使用其他批號(hào)或其他來(lái)源的試劑替代本試劑盒中的試劑。

技術(shù)要點(diǎn)

1、重溶或者混合蛋白溶液時(shí)，避免起泡。

2、加標(biāo)準(zhǔn)品與樣本時(shí)，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加

樣，避免交叉污染。

3、合適的溫育時(shí)間，和充分的洗滌步驟，是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。

4、底物溶液為無(wú)色液體，保存過(guò)程中變?yōu)樗{(lán)色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍(lán)色底物產(chǎn)物，會(huì)瞬間變?yōu)辄S色。

6、實(shí)驗(yàn)中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

7、所有液體組分，使用前充分搖勻，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)標(biāo)明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作。

廢物處理

所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有責(zé)任根據(jù)其實(shí)驗(yàn)的類(lèi)型和危險(xiǎn)性級(jí)別，進(jìn)行廢物和污物的處 理，同時(shí)要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對(duì)待所有的廢物和污物。