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大鼠真皮毛乳頭細(xì)胞

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  1. 細(xì)胞簡介:

    大鼠真皮毛乳頭細(xì)胞分離自皮膚毛囊組織;毛囊是表皮細(xì)胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進(jìn)的真皮毛乳頭,中心是一根毛發(fā),立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上,附著點(diǎn)的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸,毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中,毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度,它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘,以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個(gè)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織。毛囊實(shí)際上是由結(jié)締組織和上皮兩部分所組成,除了具有結(jié)締組織和血管的真皮乳頭(毛乳頭)外,毛囊其余部分都是由表皮細(xì)胞分化而來。真皮毛乳頭細(xì)胞位于毛囊基底部,是一類成纖維細(xì)胞。在毛囊發(fā)育早期,真皮細(xì)胞向單層上皮細(xì)胞發(fā)出第一真皮信號,刺激上皮局部形成毛基板。隨后毛基板細(xì)胞向下方的真皮發(fā)出第一表皮信號,誘導(dǎo)其形成有成纖維細(xì)胞組成的凝集細(xì)胞團(tuán)。在此過程中,毛母質(zhì)細(xì)胞逐漸包裹凝集細(xì)胞團(tuán),形成成熟的真皮毛乳頭細(xì)胞。作為毛囊中的重要細(xì)胞群,真皮毛乳頭細(xì)胞的分子機(jī)制和臨床應(yīng)用正在被逐漸認(rèn)識和解析。

  2. 方法簡介:

    實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠真皮毛乳頭細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

  3. 質(zhì)量檢測:

    實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠真皮毛乳頭細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

  4. 培養(yǎng)信息:

    包被條件 PLL(0.1mg/ml)
    培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
    產(chǎn)品貨號 H11101
    換液頻率 每2-3天換液一次
    生長特性 貼壁
    細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
    傳代特性 可傳2-3代
    消化液 0.25%胰蛋白酶
    培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%

    大鼠真皮毛乳頭細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

  5.  

    1. 客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。

      1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

      2. 貼壁細(xì)胞消化

      1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;

      2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化;

      3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

      4)待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察,用于實(shí)驗(yàn);之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

      3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

      因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因

      沒貼好影響實(shí)驗(yàn);包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

      四、注意事項(xiàng)

      1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。

      2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。

      3. 消化過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。

      4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑,個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

      5. 該細(xì)胞只可用于科研。

      備注:由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考 

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