【產(chǎn)品名稱】
通用名：禽白血病病毒P27抗原檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Avian Leukosis Virus P27 Antigen Test Kit(ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒
【預期用途】 禽白血病(Avian Ieukemia，AL)作為一種雞獨有的病癥，廣泛存在于我國養(yǎng)禽業(yè)，是危害我國養(yǎng)雞業(yè)的一種重要疾病。
p27蛋白是禽白血病病毒的重要組成蛋白之一，不僅構(gòu)成ALV病毒粒子的衣殼，還是ALV主要的結(jié)構(gòu)蛋白，占禽白血病病毒總蛋白含量的30%，且p27蛋白氨基酸序列高度保守，含有反轉(zhuǎn)錄病毒的群體特異性抗原，易于被檢測到。所以在企業(yè)實際生產(chǎn)實踐中，通常選擇ELISA試劑盒這種設(shè)備簡單、操作方便的方法來對禽白血病進行快速篩查。
本試劑盒用于檢測雞的卵清、胎糞、組織樣品及細胞培養(yǎng)物中禽白血病病毒 p27抗原。
【禽白血病病毒P27抗原檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）組成】
| 序號 | 名稱 | 規(guī)格/96T×1 | 規(guī)格/96T×2 | 規(guī)格/96T×5 |
| 1 | 酶標記物 | 11ml×1(紅蓋) | 11ml×2(紅蓋) | 26ml×2(紅蓋) |
| 2 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1(白蓋) | 40ml×1(白蓋) | 200ml×1(透明) |
| 3 | 底物顯色液 | 10ml×1(黑蓋) | 10ml×2(棕蓋) | 25ml×2(黑蓋) |
| 4 | 終止液 | 5ml×1(黃蓋) | 10ml×1(黃蓋) | 25ml×1(黃蓋) |
| 5 | 陽性對照 | 1.0 ml×1(紅蓋) | 1.5 ml×1(紅蓋) | 2.0 ml×1(紅蓋) |
| 6 | 陰性對照 | 1.0 ml×1(綠蓋) | 1.5 ml×1(綠蓋) | 2.0 ml×1(綠蓋) |
| 7 | 酶標板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
| 8 | 蓋板膜 | 1 | 2 | 5 |
| 9 | 自封袋 | 1 | 1 | 2 |
| 10 | 說明書 | 1 | 1 | 1 |
【儲存及有效期】2～8℃保存，有效期12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。
【適用儀器】 含630nm波長的酶標儀，25℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。
【樣品準備】
1.樣品處理
1.1 卵清：取全蛋，破碎后取稀卵清，直接進行檢測。凍融可以降低卵清的粘稠度。
1.2 胎糞：將胎糞放入含有0.5ml工作洗滌液的離心管中，反復凍融 2 次。恢復室溫后，5000r/min離心2分鐘，取上清進行檢測。
1.3 組織樣品：取0.5g組織病料于研磨器劇中，加入0.5ml工作洗滌液勻漿，將組織懸液轉(zhuǎn)移至離心管中反復凍融 2 次，5000r/min離心2分鐘，取上清進行檢測。
1.4 細胞培養(yǎng)物：將細胞培養(yǎng)物反復凍融 2 次。恢復室溫后，5000r/min離心2分鐘（若為細胞培養(yǎng)板，則需靜置30分鐘），取上清進行檢測。
2.洗滌液的配制
濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶加熱使其溶解后再使用。
【禽白血病病毒P27抗原檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設(shè)陰性、陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加100μl。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置室溫（20～25℃）（推薦水�。┍芄夥磻�1小時。
5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加300μl工作洗滌液，無需靜置，甩掉板孔中的洗滌液，重復洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔加酶標記物100μl，蓋好蓋板膜，置室溫（20～25℃）避光反應1小時。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔加入底物顯色液100μl，置室溫( 20～25℃)避光反應15分鐘。
9.每孔加入終止液50μl，混勻，10分鐘內(nèi)于630nm測定各孔吸光值。
【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照的平均OD值即ODNC應＜0.2，陽性對照的平均OD值即ODPC應大于≥0.5
S為樣品孔OD630nm值，P為陽性對照OD630nm平均值。
如果S/P＞0.2，判為陽性；
如果S/P≤0.2，判為陰性。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測禽白血病病毒P27抗原，根據(jù)S/P值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.若試劑盒陰陽性對照、酶標記物出現(xiàn)少量懸浮物，屬于正�，F(xiàn)象。
4.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
5.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。
6.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
7.用于檢測的樣品應保持新鮮。
8.試驗結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
9.不同批號試劑組分不得混用。
