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β-興奮劑檢測(cè)試劑盒

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  原理及用途

β-興奮劑檢測(cè)試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)尿液、血清、牛奶、組織等樣本中的β-興奮劑(beta-adrenergic,BAA),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的β-興奮劑和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗β-興奮劑抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含β-興奮劑含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較即可得出樣本中β-興奮劑的殘留量。

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度:0.1ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min15min

2.3 檢測(cè)下限:

尿液血清、牛奶……………0.3ppb

組織……………………………0.4ppb

飼料、奶粉……………………1ppb

2.4 交叉反應(yīng)率:

鹽酸克倫特羅…………………100%

沙丁胺醇………………………80%

 2.5 樣本回收率:

尿樣血清、牛奶……………95%±10%

組織、飼料……………………85%±15%

奶粉……………………………95%±20%

3 β-興奮劑檢測(cè)試劑盒組成

酶標(biāo)板……………………………96孔

標(biāo)準(zhǔn)液:各1ml

0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

高標(biāo)準(zhǔn)液(紅蓋):100ppb…………1ml

酶標(biāo)記物(紅蓋)……………………5.5ml

抗體工作液(藍(lán)蓋)…………………5.5ml

底物液A(白蓋)……………………6ml

底物液B(黑蓋)……………………6ml

終止液(黃蓋)………………………6ml

20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml

10×濃縮復(fù)溶液(黃蓋)…………50ml

說(shuō)明書(shū)…………………………………1份

蓋板膜…………………………………1張

自封袋…………………………………1個(gè)

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、水浴鍋、天平(感量0.01g)

4.2 微量移液器:?jiǎn)蔚?0µl-200µl、100µl-1000µl,多道300µl

4.3 試劑:甲醇、正己烷、無(wú)水硫酸鈉

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知:

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液:

配液1:復(fù)溶液

10×濃縮復(fù)溶液用去離子水10倍稀釋(1份10×濃縮復(fù)溶液加9份去離子水),用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。

配液2:工作洗滌液

    20×濃縮洗滌液20倍稀釋(1份20×濃縮洗滌液加19份去離子水)。

5.3 樣本前處理步驟:

5.3.1 尿液、血清、牛奶處理方法:

1)將樣本室溫4000r/min離心5min,血清和尿液取上層清液0.1ml(牛奶先去除上層脂肪層,再取下層液0.1ml),加入0.2ml復(fù)溶液(配液1),混勻后取50ul分析。

樣本稀釋倍數(shù):3    檢測(cè)下限:0.3ppb

5.3.2 組織樣本處理方法:

1)稱(chēng)取均質(zhì)后的組織樣本1g±0.05g,加入3ml復(fù)溶液(配液1),充分振蕩2min,室溫4000r/min離心10min (若組織樣本中油脂含量較高,可在振蕩后放入85℃水浴10min后再離心),取50µl上清液進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù):4   檢測(cè)下限:0.4ppb

5.3.3飼料樣本處理方法:

1)稱(chēng)取均質(zhì)后的飼料樣品1g±0.05g,加入10ml甲醇,再加入5g無(wú)水硫酸鈉,振蕩2min,室溫 4000r/min離心10min;

2)取上清液1ml于50-60℃下氮?dú)饣蚩諝獯蹈,?ml復(fù)溶液(配液1)溶解干燥的殘留物,再加入1ml正己烷,振蕩30s,室溫4000r/min離心5min。

3)去除上層正己烷,取50µl下層液進(jìn)行分析。

    樣本稀釋倍數(shù):10    檢測(cè)下限:1ppb

5.3.4奶粉樣本處理方法:

1)稱(chēng)取均質(zhì)后的奶粉樣品1g±0.05g,加入5ml復(fù)溶液(配液1),振蕩至完全溶解,室溫 4000r/min離心5min;

2)去除上層脂肪層,取下層液0.1ml,加入0.1ml復(fù)溶液(配液1),混勻后取50ul分析。

樣本稀釋倍數(shù):10    檢測(cè)下限:1ppb

6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。

6.1    號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30min。

6.3    滌:小心揭開(kāi)蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加350ul工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

6.4    色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15min。

6.5     止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。

6.6 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10min內(nèi)完成。

7 結(jié)果分析

7.1 百分吸光率的計(jì)算

    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即

 百分吸光度值(%)=

A

×100%

A0

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制與計(jì)算

    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。

    若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來(lái)電索。

β-興奮劑檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)

8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

8.2 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不成線(xiàn)性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

8.3 混合要均勻,洗板要徹底,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。

8.4 在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線(xiàn)照射。

8.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。

9 貯藏及保存期

儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。

質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

 

 

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