1 原理及用途
沙丁胺醇檢測試劑盒酶聯(lián)免疫采用間接競爭ELISA方法檢測尿樣、組織、飼料等樣本中的沙丁胺醇(Salbutamol,SAL),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本溶液,樣本中的沙丁胺醇和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗沙丁胺醇抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含沙丁胺醇含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中沙丁胺醇的殘留量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.1ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~15min
2.3 檢測下限:
尿液……………………………0.5ppb
組織……………………………0.4ppb
飼料、肝臟………………………2ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
沙丁胺醇…………………………100%
鹽酸多巴酚丁胺…………………7.2%
西馬特羅…………………………0.1%
克倫特羅…………………………3.6%
萊克多巴胺………………………0.1%
腎上腺素…………………………0.1%
異丙腎上腺素……………………<1%
2.5 樣本回收率:
尿樣……………………………………90%±10%
組織……………………………………80%±10%
飼料、豬肝……………………………80%±20%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液:各1ml
0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
高標(biāo)準(zhǔn)液(紅蓋):100ppb…………1ml
酶標(biāo)記物(紅蓋) …………………5.5ml
抗體工作液(藍(lán)蓋) ………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20×濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
10×復(fù)溶液(黃蓋)……………………50ml
說明書…………………………………1份
蓋板膜…………………………………1張
自封袋…………………………………1個
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:氫氧化鈉、濃鹽酸
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:0.01M鹽酸溶液
稱取86ul濃鹽酸加去離子水混勻,定容至100ml。
配液2:1M氫氧化鈉溶液
稱取4g氫氧化鈉加去離子水混勻溶解,定容至100ml。
配液3:復(fù)溶液
將10×復(fù)溶液用去離子水10倍稀釋(1份10×復(fù)溶液加9份去離子水),用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月。
配液4:工作洗滌液
將20×濃縮洗滌液20倍稀釋(1份20×濃縮洗滌液加19份去離子水)。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 尿樣處理方法:
取1ml清亮尿樣(渾濁尿樣需要過濾或經(jīng)4000r/min離心5min以得到清亮尿樣)于10ml離心管中,加入4ml復(fù)溶液(配液3),混合振蕩30s,取50µl進(jìn)行分析。暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。
樣本稀釋倍數(shù):5 檢測下限:0.5ppb
5.3.2 組織樣本處理方法:
稱取均質(zhì)后的組織樣本1g±0.05g,加入3ml復(fù)溶液(配液3),充分振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min (若組織樣本中油脂含量較高,可在振蕩后放入85℃水浴10min后再離心)。取50µl上清液進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù):4 檢測下限:0.4ppb
5.3.3 飼料、豬肝樣本處理方法:
1)稱取粉碎后的樣本1g±0.05g,加入4ml 0.01M鹽酸溶液(配液1),振蕩2min;室溫 4000r/min以上離心10min,用1M氫氧化鈉溶液(配液2)調(diào)至PH值至7.5左右;
2)取上清液100ul,加入400ul復(fù)溶液(配液3),混合振蕩30s,取50µl進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù):20 檢測下限:2ppb
6 沙丁胺醇檢測試劑盒酶聯(lián)免疫酶聯(lián)免疫試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
6.1 編 號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗 滌:小心揭開蓋板膜,甩去孔內(nèi)液體,每孔加350ul工作洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干(用吸水紙拍干,拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 顯 色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘(若藍(lán)色過淺,可適當(dāng)延長反應(yīng)時間)。
6.5 終 止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.6 測吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)= | A | ×100% |
A0 |
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索。
8 沙丁胺醇檢測試劑盒酶聯(lián)免疫注意事項
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要徹底,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。