細(xì)胞背景:肺泡巨噬細(xì)胞由單核細(xì)胞分化而來,廣泛分布在肺間質(zhì)內(nèi),在細(xì)支氣管以下的管道周圍和肺泡隔內(nèi)較多。肺泡巨噬細(xì)胞的吞噬、免疫和分泌作用都十分活躍,有重要防御功能。吸入空氣中的塵粒、細(xì)菌等異物進(jìn)入肺泡和肺間質(zhì),多被巨噬細(xì)胞吞噬清除,故細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)常見塵粒、細(xì)菌等物進(jìn)入肺泡和肺間質(zhì),多被巨噬細(xì)胞吞噬清除,故細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)常見塵粒、次級(jí)溶酶體及吞噬體等。肺巨噬細(xì)胞還可吞噬衰老的紅細(xì)胞,在心力衰竭患者出現(xiàn)肺瘀血時(shí),大量紅細(xì)胞從毛細(xì)血管溢出,被巨噬細(xì)胞吞噬。吞噬異物的巨噬細(xì)胞,有的從肺泡腔經(jīng)呼吸道粘液流動(dòng)和纖毛運(yùn)動(dòng)而被咳出,有的進(jìn)入肺淋巴管隨淋巴進(jìn)入肺淋巴結(jié)內(nèi)。
收貨處理:取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)
傳代密度:細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)
傳代代數(shù):可傳2-3代,建議收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)
傳代比例:首次傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿
傳代方法
1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2.添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化;
3.用吸管輕輕吹打混勻,按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4.待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后每2-3天換液一次新鮮的完全培養(yǎng)基