細胞簡介：

小鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細胞分離自顳下頜關(guān)節(jié)軟骨組織，顳下頜關(guān)節(jié)又稱顳頜關(guān)節(jié)”或下頜關(guān)節(jié)”。由下頜頭與顳骨下頜窩和關(guān)節(jié)結(jié)節(jié)組成，左右合成一聯(lián)合關(guān)節(jié)，主理張口閉口和咀嚼運動。關(guān)節(jié)囊松弛，側(cè)方為內(nèi)、外側(cè)韌帶所加強。囊內(nèi)的關(guān)節(jié)盤呈卵圓形，由纖維軟骨組成，區(qū)分為前、中、后三部分。上面呈鞍狀，前凹后凸，與關(guān)節(jié)結(jié)節(jié)和下頜窩的凸凹輪廓相對應(yīng)；下面凹正對下頜頭，周緣與關(guān)節(jié)囊相接，前緣與穿過關(guān)節(jié)囊的翼外肌腱相連。關(guān)節(jié)盤將關(guān)節(jié)腔分成上、下兩半。關(guān)節(jié)外更有蝶下頜韌帶(蝶棘至下頜小舌)和莖突下頜韌帶(莖突至下頜角)予以加固。關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨，表面光滑、呈淡藍色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結(jié)締組織的膠原纖維構(gòu)成的基本框架，這種框架呈半環(huán)形，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下面的骨質(zhì)上，上端朝向關(guān)節(jié)面，這種結(jié)構(gòu)使關(guān)節(jié)軟骨緊緊與骨結(jié)合起來而不會掉下來，同時當(dāng)受到壓力時候，還可以有少許的變形，起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間，散在分布著軟骨細胞，軟骨細胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細胞組成，這些軟骨細胞維持關(guān)節(jié)軟骨的正常代謝。關(guān)節(jié)軟骨沒有神經(jīng)支配，也沒有血管，其營養(yǎng)成分必須從關(guān)節(jié)液中取得，而其代謝廢物也必須排至關(guān)節(jié)液中，關(guān)節(jié)軟骨的這種營養(yǎng)代謝必須通過關(guān)節(jié)運動，使關(guān)節(jié)軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關(guān)節(jié)運動對于維持關(guān)節(jié)軟骨的正常結(jié)構(gòu)起重要的作用。關(guān)節(jié)軟骨細胞位于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)。幼稚的關(guān)節(jié)軟骨細胞位于關(guān)節(jié)軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關(guān)節(jié)軟骨表面平行，越向深層的關(guān)節(jié)軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的關(guān)節(jié)軟骨細胞多2-8個成群分布于關(guān)節(jié)軟骨陷窩內(nèi)，這些關(guān)節(jié)軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，關(guān)節(jié)軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，關(guān)節(jié)軟骨細胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的關(guān)節(jié)軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細胞采用膠原酶聯(lián)合中性蛋白酶消化制備而來，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的小鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細胞經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

小鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞培養(yǎng)狀態(tài)：發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

三、使用方法

小鼠顳下頜關(guān)節(jié)軟骨細胞是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈梭形、多角形，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細胞可傳2-3代左右；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。

1. 客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

   1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

   2. 貼壁細胞消化

   1）吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

   2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化；

   3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

   4）待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察，用于實驗；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

   3. 細胞實驗

   因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因

   沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

   四、注意事項

   1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個月。

   2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

   3. 消化過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

   4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運輸?shù)脑�因，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

   5. 該細胞只可用于科研。

   備注：由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考