細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠胚胎肢芽間充質(zhì)干細(xì)胞分離自胚胎肢芽；胚胎肢芽存在于兩棲類以上的大多數(shù)脊椎動(dòng)物胚胎中，在四肢發(fā)生的初期階段，在身體兩側(cè)有呈芽狀的突起，內(nèi)部是中胚層側(cè)板的體壁板垱厚形成，表面有表皮覆蓋。在這個(gè)中胚層區(qū)肢芽迅速伸長(zhǎng)，不久，在其前端即見有指的突起。在此時(shí)期間，其內(nèi)部的中胚層分化成軟骨、肌肉等。這些分化組織，在將肢芽作分離培養(yǎng)的時(shí)候也可以獲得。根據(jù)對(duì)兩棲類的有尾類的研究，作為肢原基各部的胚發(fā)能力，肢芽物質(zhì)的大部分是位于背半部，而前半部主要參與基部形成，后半部參與前端的形成。在實(shí)驗(yàn)上，即使將肢的原基分成二半，每一半調(diào)整好都可形成基本上近于正常形態(tài)的肢體，而且肢體各軸的極性和側(cè)性也逐漸決定。間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）是屬于中胚層的一類多能干細(xì)胞，主要存在于結(jié)締組織和器官間質(zhì)中，是具有高度自我更新和多向分化潛能的干細(xì)胞；這些細(xì)胞可以通過分裂維持自身細(xì)胞的特性和數(shù)量，并在特定條件下轉(zhuǎn)變成為一種或多種構(gòu)成機(jī)體組織或器官的細(xì)胞，從而在組織修復(fù)等方面發(fā)揮積極作用。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎肢芽間充質(zhì)干細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎肢芽間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

小鼠胚胎肢芽間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

1. 客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

   1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

   2. 貼壁細(xì)胞消化

   1）吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

   2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化；

   3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

   4）待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察，用于實(shí)驗(yàn)；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

   3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

   因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因

   沒貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。

   四、注意事項(xiàng)

   1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。

   2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。

   3. 消化過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

   4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑�因，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

   5. 該細(xì)胞只可用于科研。

   備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考