細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠輸卵管上皮細(xì)胞分離自輸卵管組織；輸卵管位于子宮底兩側(cè)，包裹在子宮闊韌帶上緣內(nèi)。自子宮兩角分別伸展至左、右卵巢，是輸送卵細(xì)胞進(jìn)入子宮的管道，也是卵受精的場(chǎng)所。輸卵管主要分漏斗部、壺腹部、峽部和子宮部，管壁均由粘膜、肌層和漿膜三層組成。粘膜形成許多縱行而分支的皺襞，壺腹部的皺襞最發(fā)達(dá)，高而多分支，故管腔不規(guī)則；至子宮部的皺襞漸減少。粘膜上皮為單層柱狀。由纖毛細(xì)胞和分泌細(xì)胞組成。纖毛細(xì)胞以漏斗部和壺腹部最多，至峽部和子宮部逐漸減少，纖毛向子宮方向擺動(dòng)，使卵移向子宮并阻止病菌進(jìn)入腹膜腔.分泌細(xì)胞表面有微絨毛，頂部胞質(zhì)內(nèi)有分泌顆粒，其分泌物構(gòu)成輸卵管液。輸卵管上皮細(xì)胞在卵巢雌激素和孕激素的作用下，隨月經(jīng)周期而有變化。雌激素促進(jìn)輸卵管上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)的功能活動(dòng)，在子宮內(nèi)膜增生晚期（排卵前）。纖毛細(xì)胞變成高柱狀，纖毛增多，分泌細(xì)胞頂部充滿分泌顆粒，功能旺盛。至分泌晚期，兩種細(xì)胞均變矮，分泌細(xì)胞的分泌顆粒排空，纖毛細(xì)胞的纖毛也減少。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠輸卵管上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠輸卵管上皮細(xì)胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

大鼠輸卵管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

1. 客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

   1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

   2. 貼壁細(xì)胞消化

   1）吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

   2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化；

   3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

   4）待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察，用于實(shí)驗(yàn)；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

   3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

   因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因

   沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。

   四、注意事項(xiàng)

   1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。

   2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

   3. 消化過(guò)程中，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

   4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑�因，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。

   5. 該細(xì)胞只可用于科研。

   備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考