細胞簡介：

大鼠腎小球上皮細胞分離自腎組織；腎臟是機體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內代謝產物及某些廢物、毒物，同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質，如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、碳酸氫鈉等，以調節(jié)水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能，生成腎素、促紅細胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等，又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機體內環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構造。血液經由入球小動脈進入腎小球。腎小球上皮細胞是由間充質細胞分化發(fā)育、襯貼于腎小球血管腔的單層扁平上皮細胞，是腎小球的固有細胞之一，也是構成腎小球濾過膜的重要組成部分。腎小球上皮細胞的正常結構和功能是腎單位濾過及腎小球微環(huán)境穩(wěn)定的重要保障。腎小球濾過膜的最外層為上皮細胞層，厚約40nm，腎小球上皮細胞是腎小囊的臟層上皮細胞，貼附于腎小球血管外側基底膜上。上皮細胞又稱足細胞，足細胞的不規(guī)則突起為足突，其間有許多狹小間隙，血液經濾過膜過濾入腎小球囊。腎小球上皮細胞可通過合成和分泌腎上腺髓質肽抑制系膜細胞增殖，腎上腺髓質肽作為一種重要的旁分泌因子，可保持腎小球微環(huán)境穩(wěn)定，并參與腎小球的炎癥過程。體外培養(yǎng)的腎小球上皮細胞對各型腎小球腎炎具有重要的研究價值。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠腎小球上皮細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的大鼠腎小球上皮細胞經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

大鼠腎小球上皮細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

1. 客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

   1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

   2. 貼壁細胞消化

   1）吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；

   2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化；

   3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

   4）待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察，用于實驗；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

   3. 細胞實驗

   因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因

   沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

   四、注意事項

   1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個月。

   2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。

   3. 消化過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

   4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和技術部溝通；由于運輸?shù)脑�因，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

   5. 該細胞只可用于科研。

   備注：由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實驗室參考