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細胞簡介:
兔腎上腺皮質(zhì)細胞分離自腎上腺組織;腎上腺是機體相當重要的內(nèi)分泌器官,由于位于兩側腎臟的上方,故名腎上腺。腎上腺左右各一,位于腎的上方,共同為腎筋膜和脂肪組織所包裹。左腎上腺呈半月形,右腎上腺為三角形。從側面觀察,腺體分腎上腺皮質(zhì)和腎上腺髓質(zhì)兩部分,周圍部分是皮質(zhì),內(nèi)部是髓質(zhì)。腎上腺內(nèi)部是髓質(zhì)部分,分泌腎上腺素和去甲腎上腺素。這些激素在應激狀態(tài)釋放增多,能夠幫助升高血壓,加快心率,升高血糖,動員全身的儲備物質(zhì),為機體與外界環(huán)境的抗爭作好充分準備。腎上腺外部是皮質(zhì)部分,分泌醛固酮、皮質(zhì)醇和少量的雌雄激素。醛固酮能夠促進小便中尿鉀的排出和尿鈉的重吸收,正常數(shù)量的醛固酮,對維持機體正常血壓有重要作用。但是如果過多分泌,會導致高血壓和低血鉀。皮質(zhì)醇是機體必需的激素之一。當機體處于應激狀態(tài)時,比如感冒,發(fā)燒,遇到突發(fā)事件的時候,腎上腺皮質(zhì)分泌大量的皮質(zhì)醇,這些皮質(zhì)醇能夠動員機體的存儲能源,為應對內(nèi)部或者外部重要事件提供充分的物質(zhì)準備。當皮質(zhì)醇缺乏時,機體在遇到重大事件的時候,往往缺乏足夠應對能力,容易被病毒或外界壓力所擊倒。腎上腺產(chǎn)生的雄激素,對雄性來講,并非必不可少,但是對雌性而言,是雄激素的一個重要來源。
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方法簡介:
實驗室分離的兔腎上腺皮質(zhì)細胞采用膠原酶消化法制備而來,細胞總量約為5×10⁵cells/瓶。
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質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔腎上腺皮質(zhì)細胞經(jīng)3β-HSD免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
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培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號 P24281 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態(tài) 梭形、多角形 傳代特性 可傳1-3代左右;2代以內(nèi)狀態(tài)最佳 消化液 0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 兔腎上腺皮質(zhì)細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
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客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4)待細胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察,用于實驗;之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因
沒貼好影響實驗;包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
四、注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 消化過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和技術部溝通;由于運輸?shù)脑,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細胞只可用于科研。
備注:由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實驗室參考
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