細(xì)胞簡介：

兔腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞分離自腸組織；神經(jīng)嵴干細(xì)胞（neural crest stem cells，NCSC），即外周神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞，起源于胚胎期的神經(jīng)管背側(cè)，與中樞神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上有著顯著不同，NCSC可表達(dá)低親和力神經(jīng)營養(yǎng)因子受體p75NTR而不能分化出少突膠質(zhì)細(xì)胞，而中樞神經(jīng)系統(tǒng)干細(xì)胞與之恰好相反。NCSC可在不同部位分化出多種組織，如神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)、黑色素細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞、平滑肌、骨骼肌及骨等，其中可特異性分化出腸神經(jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)的NCSC，被稱為腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞（gut neural crest stem cells，GNCSC）。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞采用中性蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞經(jīng)Nestin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

兔腸神經(jīng)嵴干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

• 客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
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• 1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
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• 2. 懸浮細(xì)胞處理
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• 1）收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中，用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；
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• 2）1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀；
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• 3）加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞；將分散好的細(xì)胞調(diào)整適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
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• 4）若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大，無法機(jī)械吹散時(shí)，向步驟2）中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻，37℃溫浴2-3min，消化結(jié)束后，加入胰酶抑制劑(或血清）終止消化，用吸管輕輕吹打，分散細(xì)胞；1200rpm離心5min，棄上清，
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• 收集細(xì)胞沉淀；
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• 5）加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻；按傳代比例進(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
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• 6）待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察，用于實(shí)驗(yàn)；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
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• 四、注意事項(xiàng)
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• 1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。
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• 2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。
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• 3. 消化過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
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• 4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑�因，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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• 5. 該細(xì)胞只可用于科研。
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• 特殊注意事項(xiàng)
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• 6. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意不要直接倒掉，造成損失；懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小，離心收集時(shí)，請(qǐng)注意懸液中細(xì)胞是否收集完全，可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時(shí)間3-5mi
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• n，增加細(xì)胞獲取量
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• 備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考