細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞分離自胎盤(pán)組織；胎盤(pán)(placenta)是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤(pán)從母體取得營(yíng)養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤(pán)還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類(lèi)和魚(yú)類(lèi)也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱(chēng)假胎盤(pán)。胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell，MSC)是一種多能干細(xì)胞，是具有自我復(fù)制能力的多潛能細(xì)胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細(xì)胞像APSC多能細(xì)胞。在胚胎發(fā)育中來(lái)源于中胚層。在機(jī)體正常的組織損傷修復(fù)過(guò)程中，MSC是一種重要的參與組織再生的細(xì)胞庫(kù)。在組織損傷引起的特殊信號(hào)作用下，MSC遷移到受損部位，在局部聚集增殖，依據(jù)不同的損傷信號(hào)沿著不同途徑分化。MSC易于分離擴(kuò)增，體外倍增能力旺盛，能保持其多向分化能力。因此，MSC是一種實(shí)用的組織修復(fù)種子細(xì)胞。相較于其他干細(xì)胞，胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞具有來(lái)源方便，細(xì)胞數(shù)量充足，易于分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增和純化，傳代擴(kuò)增多代后仍具有干細(xì)胞特性。胎盤(pán)是干細(xì)胞的最佳來(lái)源。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞采用胰蛋白酶 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 貼壁細(xì)胞消化

1）吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化；

3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察，用于實(shí)驗(yàn)；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因

沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴(lài)氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。

四、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

3. 消化過(guò)程中，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑�因，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。

5. 該細(xì)胞只可用于科研。

備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考