細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔腸道干細(xì)胞分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至肛門的消化管。腸是消化管中最長(zhǎng)的一段，也是功能最重要的一段。哺乳動(dòng)物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的，大腸主要濃縮食物殘?jiān)�，形成糞便，再通過直腸經(jīng)肛門排出體外。腸道堪稱身體最勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實(shí)它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)最大的微生態(tài)系統(tǒng)。腸道干細(xì)胞（ISC）也稱腸道上皮干細(xì)胞，主要位于腸黏膜隱窩內(nèi)，其與腸道黏膜上皮的更新和修復(fù)密切相關(guān)。正常情況下，位于隱窩基底部的腸道干細(xì)胞不斷向隱窩頂部（腸腔方向）遷移，整個(gè)遷移過程大約3-5d，在遷移過程中腸道干細(xì)胞分化形成不同的腸黏膜細(xì)胞。當(dāng)受到外界生理或病理信號(hào)作用時(shí)，ISC可持續(xù)增殖、分化為成熟腸上皮細(xì)胞，如腸型細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞和潘氏細(xì)胞等，從而維持腸道黏膜結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定性。

方法簡(jiǎn)介：

普諾賽實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸道干細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化后，用腸道干細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

普諾賽實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸道干細(xì)胞經(jīng)MSI-1免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

兔腸道干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用普諾賽配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

三、使用方法

人外周血淋巴細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈圓形，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞不增殖；不傳代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 懸浮細(xì)胞處理

1）收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中，用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；

2）1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀；

3）加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞；將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4）若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大，無法機(jī)械吹散時(shí)，向步驟2）中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻，37℃溫浴2-3min，消化結(jié)束后，加入胰

酶抑制劑(或血清）終止消化，用吸管輕輕吹打，分散細(xì)胞；1200rpm離心5min，棄上清，

收集細(xì)胞沉淀；

5）加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻；按傳代比例進(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

6）待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察，用于實(shí)驗(yàn)；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

四、注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。

2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。

3. 消化過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑�因，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

5. 該細(xì)胞只可用于科研。

特殊注意事項(xiàng)

6. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意不要直接倒掉，造成損失；懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小，離心收集時(shí)，請(qǐng)注意懸液中細(xì)胞是否收集完全，可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時(shí)間3-5min，增加細(xì)胞獲取量。

備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考