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兔卵巢成纖維細(xì)胞

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  1. 細(xì)胞簡(jiǎn)介:

    兔卵巢成纖維細(xì)胞分離自卵巢組織;卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官,卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同,僅左側(cè)發(fā)育(右側(cè)已退化),呈葡萄狀,均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡,卵泡呈黃色,卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有兩個(gè)卵巢,但是部分魚(yú)類的兩個(gè)卵巢融合為單個(gè)結(jié)構(gòu),而所有鳥(niǎo)類只有左側(cè)卵巢有機(jī)能。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對(duì)卵圓形的生殖器官,它的外表有一層上皮組織,其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周?chē)糠郑饕陕雅莺徒Y(jié)締組織構(gòu)成;髓質(zhì)位于中央,由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng)。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái);成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的卵巢成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開(kāi)始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁完全,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長(zhǎng),不聚集成團(tuán);細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,有的交叉重疊生長(zhǎng),平坦、胞體較大,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。卵巢成纖維細(xì)胞大多分布于卵巢表面,其主要特點(diǎn)和功能:①成纖維細(xì)胞在體外易于培養(yǎng);②卵巢損傷后,成纖維細(xì)胞能修復(fù)和重塑卵巢;③能在卵巢炎癥時(shí)有效控制炎癥擴(kuò)散。

  2. 方法簡(jiǎn)介:

    實(shí)驗(yàn)室分離的兔卵巢成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

  3. 質(zhì)量檢測(cè):

    實(shí)驗(yàn)室分離的兔卵巢成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

  4. 培養(yǎng)信息:

    培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
    產(chǎn)品貨號(hào) P24402
    換液頻率 每2-3天換液一次
    生長(zhǎng)特性 貼壁
    細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
    傳代特性 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
    消化液 0.25%胰蛋白酶
    培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%

    兔卵巢成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

    客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

    1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

    2. 貼壁細(xì)胞消化

    1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;

    2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化;

    3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

    4)待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察,用于實(shí)驗(yàn);之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

    3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

    因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因

    沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn);包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。

    四、注意事項(xiàng)

    1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。

    2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

    3. 消化過(guò)程中,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

    4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。

    5. 該細(xì)胞只可用于科研。

    備注:由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考

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