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細(xì)胞簡介:
兔腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腎臟;腎臟是兔的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水分及其他有用物質(zhì),如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、碳酸氫鈉等,以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能,生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等,又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎臟內(nèi)部的結(jié)構(gòu),可分為腎實(shí)質(zhì)和腎盂兩部分。在腎縱切面可以看到,腎實(shí)質(zhì)分內(nèi)外兩層:外層為皮質(zhì),內(nèi)層為髓質(zhì)。腎皮質(zhì)位于腎實(shí)質(zhì)表層,富含血管,新鮮時(shí)呈紅褐色,由一百多萬個(gè)腎單位組成。每個(gè)腎單位由腎小體和腎小管所構(gòu)成,部分皮質(zhì)伸展至髓質(zhì)錐體間,成為腎柱。腎髓質(zhì)位于腎皮質(zhì)的深面,血管較少,色淡紅,為10-20個(gè)錐體所構(gòu)成。腎錐體在切面上呈三角形。錐體底部向腎凸面,尖端向腎門,錐體主要組織為集合管,錐體尖端稱腎乳頭,每一個(gè)乳頭有10-20個(gè)乳頭管,向腎小盞漏斗部開口。在腎竇內(nèi)有腎小盞,為漏斗形的膜狀小管,圍繞腎乳頭。腎錐體與腎小盞相連接。每腎有7-8個(gè)腎小盞,相鄰2-3個(gè)腎小盞合成一個(gè)腎大盞。每腎有2-3個(gè)腎大盞,腎大盞匯合成扁漏斗狀的腎盂。腎盂出腎門后逐漸縮窄變細(xì),移行為輸尿管。腎單位是腎臟結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。腎小體包括腎小球和腎小囊。腎小體內(nèi)有一個(gè)毛細(xì)血管團(tuán),稱為腎小球,腎小球是個(gè)血管球。它由腎動(dòng)脈分支形成。腎小球外有腎小囊包繞。腎小囊分兩層,兩層之間有囊腔與腎小管的管腔相通。腎小管匯成集合管。若干集合管匯合成乳頭管,尿液由此流入腎小盞。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的最微細(xì)的血管。介于微動(dòng)脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米,數(shù)量極多,成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成,厚約0.5微米;ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織,其中有纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等。最細(xì)的毛細(xì)血管由一個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔,較粗的毛細(xì)血管由2-3個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的毛細(xì)血管,內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接(縫隙寬150埃),稱連續(xù)毛細(xì)血管;分布于內(nèi)分泌腺、腎臟等處的毛細(xì)血管,除有縫隙連接外,細(xì)胞本身有許多小孔,(孔徑800-1000埃),稱有孔毛細(xì)血管;分布于肝、脾、骨髓及某些內(nèi)分泌腺的毛細(xì)血管,管腔擴(kuò)大,稱血竇。毛細(xì)血管的管壁薄、通透性大、管徑細(xì)(8-10微米)、數(shù)量多、血流速度慢,這些特點(diǎn)使其成為血液與組織液進(jìn)行物質(zhì)交換的場(chǎng)所,又稱交換血管。血竇(sinusoid)由毛細(xì)血管管腔擴(kuò)大而成,竇壁的一般結(jié)構(gòu)與毛細(xì)血管壁相同,由單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成,內(nèi)皮細(xì)胞膜上有窗孔。不同器官的竇壁結(jié)構(gòu)各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細(xì)胞間有較寬裂隙;肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞是不連續(xù)的,有較寬的細(xì)胞隙(0.1-0.5微米);肝、脾血竇的基膜不完整或無基膜,通透性比毛細(xì)血管大,較大的蛋白質(zhì)和血細(xì)胞可以通過。肝血竇壁內(nèi)有枯否細(xì)胞,脾血竇內(nèi)外有巨噬細(xì)胞,這兩種細(xì)胞都有吞噬能力,可吞噬清除血液中的異物、細(xì)菌等有害物質(zhì),是機(jī)體單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的重要組成分。某些內(nèi)分泌腺的血竇有連續(xù)的基膜。
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方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶消化,結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。
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質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的兔腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
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培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)或明膠(0.1%) 培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào) P24403 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性 可傳2-3代 消化液 0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 兔腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4)待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察,用于實(shí)驗(yàn);之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因
沒貼好影響實(shí)驗(yàn);包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 消化過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。
備注:由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考