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豬雪旺氏細(xì)胞

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  1. 細(xì)胞簡(jiǎn)介:

    豬雪旺氏細(xì)胞分離神經(jīng)組織;周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞稱(chēng)施萬(wàn)(schwann,又名雪旺細(xì)胞)細(xì)胞,它沿神經(jīng)元的突起分布。施萬(wàn)細(xì)胞包裹在神經(jīng)纖維上,這種神經(jīng)纖維叫有髓神經(jīng)纖維。有髓神經(jīng)纖維和無(wú)髓神經(jīng)纖維的施萬(wàn)細(xì)胞的形態(tài)和功能有所差異,施萬(wàn)細(xì)胞的外表面有基膜,能分泌神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子,促進(jìn)受損的神經(jīng)元的存活及其軸突的再生,參與周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中神經(jīng)纖維的構(gòu)成。施萬(wàn)細(xì)胞的胞核呈長(zhǎng)卵圓形,其長(zhǎng)軸與軸突平行,核周有少量胞質(zhì)。由于施萬(wàn)細(xì)胞包在軸突的外面,故又稱(chēng)神經(jīng)膜細(xì)胞(neurilemmalcell),它的外面包有一層基膜。施萬(wàn)細(xì)胞最外面的一層胞膜與基膜一起往往又稱(chēng)神經(jīng)膜(neurilemma),光鏡下可見(jiàn)此膜。在有髓神經(jīng)纖維發(fā)生中,伴隨軸突一起生長(zhǎng)的施萬(wàn)細(xì)胞表面凹陷成一縱溝,軸突位于縱溝內(nèi),溝緣的胞膜相貼形成軸突系膜(mesaxon)。軸突系膜不斷伸長(zhǎng)并反復(fù)包卷軸突,把胞質(zhì)擠至細(xì)胞的內(nèi)、外邊緣及兩端(即靠近郎氏結(jié)處),從而形成許多同心圓的螺旋膜板層,即為髓鞘。故髓鞘乃成自施萬(wàn)細(xì)胞的胞膜,屬施萬(wàn)細(xì)胞的一部分。施萬(wàn)細(xì)胞的胞質(zhì)除見(jiàn)于細(xì)胞的外、內(nèi)邊緣和兩端外,還見(jiàn)于髓鞘板層內(nèi)的施-蘭切跡。該切跡構(gòu)成螺旋形的胞質(zhì)通道,并與細(xì)胞外、內(nèi)邊緣的胞質(zhì)相通。

  2. 方法簡(jiǎn)介:

    實(shí)驗(yàn)室分離的豬雪旺氏細(xì)胞采用胰蛋白酶 - 膠原酶混合消化法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

  3. 質(zhì)量檢測(cè):

    實(shí)驗(yàn)室分離的豬雪旺氏細(xì)胞經(jīng)S-100免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

  4. 培養(yǎng)信息:

    培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
    產(chǎn)品貨號(hào) P24416
    換液頻率 每2-3天換液一次
    生長(zhǎng)特性 貼壁
    細(xì)胞形態(tài) 雙極、多極形
    傳代特性 可傳1-2代
    消化液 0.25%胰蛋白酶
    培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%

    豬雪旺氏細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

    發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片

    三、使用方法

    人外周血淋巴細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈圓形,在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞不增殖;不傳代;建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。

    客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

    1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

    2. 懸浮細(xì)胞處理

    1)收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中,用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次,收集清洗液;

    2)1200-1500rpm離心3min,棄上清,收集細(xì)胞沉淀;

    3)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞;將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

    4)若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大,無(wú)法機(jī)械吹散時(shí),向步驟2)中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中,用吸-管輕輕吹打混勻,37℃溫浴2-3min,消化結(jié)束后,加入胰

    酶抑制劑(或血清)終止消化,用吸管輕輕吹打,分散細(xì)胞;1200rpm離心5min,棄上清,

    收集細(xì)胞沉淀;

    5)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻;按傳代比例進(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

    6)待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,培養(yǎng)觀察,用于實(shí)驗(yàn);之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

    四、注意事項(xiàng)

    1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。

    2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。

    3. 消化過(guò)程中,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。

    4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。

    5. 該細(xì)胞只可用于科研。

    特殊注意事項(xiàng)

    6. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,請(qǐng)注意不要直接倒掉,造成損失;懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小,離心收集時(shí),請(qǐng)注意懸液中細(xì)胞是否收集完全,可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時(shí)間3-5min,增加細(xì)胞獲取量。

    備注:由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考
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