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細(xì)胞簡介:
人胰島β細(xì)胞分離自胰腺組織;胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氫鈉、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通過胰腺管排入十二指腸,有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團(tuán)──胰島所組成,胰島主要由4種細(xì)胞組成:α細(xì)胞、β細(xì)胞、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,升高血糖;β細(xì)胞分泌胰島素,降低血糖;γ細(xì)胞分泌生長抑素,以旁分泌的方式抑制α、β細(xì)胞的分泌;PP細(xì)胞分泌胰多肽,抑制胃腸運(yùn)動、胰液分泌和膽囊收縮。胰島β細(xì)胞,即胰島B細(xì)胞,是胰島細(xì)胞的一種,屬內(nèi)分泌細(xì)胞的一種,能分泌胰島素,與胰島α細(xì)胞分泌的胰高血糖素一起起到調(diào)節(jié)血糖的作用。胰島B細(xì)胞功能受損、胰島素分泌絕對或相對不足(胰島素抵抗),會使血糖升高,從而引發(fā)糖尿病。而胰島B細(xì)胞癌變會生成胰島素瘤,引起惡性血糖降低癥狀。
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方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的人胰島β細(xì)胞采用先用膠原酶消化分離得到胰島、再用胰酶逐級消化胰島制備而來,細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。
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質(zhì)量檢測:
實(shí)驗(yàn)室分離的人胰島β細(xì)胞經(jīng)Insulin含量檢測,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
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培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml) 培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號 P24419 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形 傳代特性 不建議傳代 消化液 0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 人胰島β細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
客戶收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5mL完全培養(yǎng)基終止消化;
3)用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4)待細(xì)胞完全貼壁后,培養(yǎng)觀察,用于實(shí)驗(yàn);之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性,貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時(shí),需要對實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被,以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性,避免細(xì)胞因
沒貼好影響實(shí)驗(yàn);包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 消化過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑,個(gè)別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。
備注:由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考