-
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞分離自腦組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個(gè)半球都有三個(gè)面，即外側(cè)面(約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3)、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積)；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。小膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的一種，相當(dāng)于腦和脊髓中的巨噬細(xì)胞，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的第一道也是最主要的一道免疫防線。小膠質(zhì)細(xì)胞大約占大腦中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的20%，小膠質(zhì)細(xì)胞不停地清除著中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的損壞的神經(jīng)，斑塊及感染性物質(zhì)。無數(shù)臨床上和神經(jīng)病理學(xué)研究表明激活的小膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)退化類疾病的發(fā)病機(jī)理中起到十分重要的作用，如帕金森病、多發(fā)性硬化和阿茲海默癥等。但是過多激活或失控的小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)引起神經(jīng)毒性。它們是促炎因子和氧化應(yīng)激的重要來源，如腫瘤壞死因子(TNF)，一氧化氮，白介素等有神經(jīng)毒性的物質(zhì)。神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞的主要功能：①神經(jīng)膠質(zhì)出現(xiàn)在大腦發(fā)育早期向成熟階段轉(zhuǎn)化的過程中；②當(dāng)程序性細(xì)胞死亡時(shí)，或在大腦發(fā)育的過程中，中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損或受到病理損壞時(shí)，神經(jīng)膠質(zhì)可做為大腦的巨噬細(xì)胞；③膠質(zhì)細(xì)胞能在Ⅱ類組織相容性復(fù)合體表達(dá)CD-4陽性T細(xì)胞時(shí)表達(dá)抗原，能進(jìn)行Fc介導(dǎo)的巨噬作用，并且與造血細(xì)胞和巨噬細(xì)胞組織共享抗原。
-
方法簡(jiǎn)介：
實(shí)驗(yàn)室分離的兔神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞采用酶消化法結(jié)合差速貼壁法，在培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)缺失數(shù)天后經(jīng)搖床震蕩收集脫落細(xì)胞制備而來，細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。
-
質(zhì)量檢測(cè)：
實(shí)驗(yàn)室分離的兔神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)CD11b免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
-
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào) P24425 換液頻率 每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形 傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群 消化液 利多卡因（12mM） 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 兔神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三、使用方法
人外周血淋巴細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈圓形，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞不增殖；不傳代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 懸浮細(xì)胞處理
1）收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中，用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；
2）1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀；
3）加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞；將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4）若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大，無法機(jī)械吹散時(shí)，向步驟2）中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻，37℃溫浴2-3min，消化結(jié)束后，加入胰
酶抑制劑(或血清）終止消化，用吸管輕輕吹打，分散細(xì)胞；1200rpm離心5min，棄上清，
收集細(xì)胞沉淀；
5）加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻；按傳代比例進(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
6）待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察，用于實(shí)驗(yàn)；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 消化過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑�，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。
特殊注意事項(xiàng)
6. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意不要直接倒掉，造成損失；懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小，離心收集時(shí)，請(qǐng)注意懸液中細(xì)胞是否收集完全，可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時(shí)間3-5min，增加細(xì)胞獲取量。
備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考
