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細胞簡介:
兔腎足突細胞分離自腎組織;腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢,被鮑氏囊所包裹,是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管,匯流入靜脈,而是流入出球小動脈。在腎小球內(nèi),微血管受到高壓,而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后,形成濾液,滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體,腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。足細胞(podocyte)即腎小囊臟層上皮細胞,它附著于腎小球基底膜(GBM)的外側(cè),連同GBM和毛細血管內(nèi)皮一起構(gòu)成了腎小球血液濾過屏障。足細胞特殊的解剖位置,使得其體內(nèi)研究較為困難;又由于正常成年機體的腎臟足細胞是一種終末分化細胞,體外培養(yǎng)的原代細胞不能增殖。足細胞呈星型多突狀,胞體較大,由胞體伸出許多突起,又稱足突(FP),呈指狀交叉復蓋于GBM外表面,并通過黏附分子和蛋白多糖分子與GBM相連。足細胞在正常情況下可以分泌GBM的主要組成成分,IV型膠原和纖維連接蛋白(FN);在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解GBM作用的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)和組織蛋白酶,從而在GBM的代謝平衡中發(fā)揮重要作用。足細胞之間鄰近的足突相互交替,形成了許多30-40nm的裂孔,孔上覆蓋一層厚4-6nm的裂孔隔膜,即腎小球足突間裂孔隔膜。后者是血漿蛋白通過脈管系統(tǒng)的最后屏障,對于維持腎小球濾過屏障結(jié)構(gòu)與功能完整性發(fā)揮關(guān)鍵作用。
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方法簡介:
實驗室分離的兔腎足突細胞采用機械研磨過不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩結(jié)合膠原酶消化法制備而來,細胞總量約為5×10⁵cells/瓶。
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質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔腎足突細胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
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培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號 P24437 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細胞形態(tài) 上皮細胞樣 傳代特性 可傳1-2代 消化液 0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 兔腎足突細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
三、使用方法
人外周血淋巴細胞是一種懸浮細胞,細胞形態(tài)呈圓形,在技術(shù)部標準操作流程下,細胞不增殖;不傳代;建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 懸浮細胞處理
1)收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中,用PBS清洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次,收集清洗液;
2)1200-1500rpm離心3min,棄上清,收集細胞沉淀;
3)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞;將分散好的細胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4)若遇到懸浮細胞團塊較大,無法機械吹散時,向步驟2)中細胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中,用吸-管輕輕吹打混勻,37℃溫浴2-3min,消化結(jié)束后,加入胰
酶抑制劑(或血清)終止消化,用吸管輕輕吹打,分散細胞;1200rpm離心5min,棄上清,
收集細胞沉淀;
5)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻;按傳代比例進行接種傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
6)待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后,培養(yǎng)觀察,用于實驗;之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
四、注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 消化過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運輸?shù)脑颍瑐別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細胞只可用于科研。
特殊注意事項
6. 此細胞為懸浮細胞,請注意不要直接倒掉,造成損失;懸浮細胞因多數(shù)胞體較小,離心收集時,請注意懸液中細胞是否收集完全,可適當加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時間3-5min,增加細胞獲取量。
備注:由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實驗室參考