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兔腎成纖維細胞

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  1. 細胞簡介:

    兔腎成纖維細胞分離自腎組織;腎臟是機體的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內代謝產物及某些廢物、毒物,同時經重吸收功能保留水份及其他有用物質,如葡萄糖、蛋白質、氨基酸、鈉離子、鉀離子、碳酸氫鈉等,以調節(jié)水、電解質平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內分泌功能,生成腎素、促紅細胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等,又為機體部分內分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機體內環(huán)境的穩(wěn)定,使新陳代謝得以正常進行。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損以及骨創(chuàng)傷的修復有著十分重要的作用。腎成纖維細胞是腎臟結締組織中最重要的細胞類型,在體外培養(yǎng)中,一般大致成梭形、多角形或不規(guī)則形等,為貼壁生長型細胞。剛分離的腎成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁完全,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。其主要功能有:①組成過濾屏障內壁的重要部分;②在炎癥和致血栓物質的刺激合成必要的生物活性分子;③受損后影響系膜細胞和上皮細胞,進而影響腎臟病變。

  2. 方法簡介:

    實驗室分離的兔腎成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10⁵cells/瓶。

  3. 質量檢測:

    實驗室分離的兔腎成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

  4. 培養(yǎng)信息:

    培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
    產品貨號 P24438
    換液頻率 每2-3天換液一次
    生長特性 貼壁
    細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
    傳代特性 可傳5代左右;3代以內狀態(tài)最佳
    消化液 0.25%胰蛋白酶
    培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%

    兔腎成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)

    發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片

    三、使用方法

    人外周血淋巴細胞是一種懸浮細胞,細胞形態(tài)呈圓形,在技術部標準操作流程下,細胞不增殖;不傳代;建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。

    客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作。

    1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

    2. 懸浮細胞處理

    1)收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中,用PBS清洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次,收集清洗液;

    2)1200-1500rpm離心3min,棄上清,收集細胞沉淀;

    3)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞;將分散好的細胞調整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

    4)若遇到懸浮細胞團塊較大,無法機械吹散時,向步驟2)中細胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中,用吸-管輕輕吹打混勻,37℃溫浴2-3min,消化結束后,加入胰

    酶抑制劑(或血清)終止消化,用吸管輕輕吹打,分散細胞;1200rpm離心5min,棄上清,

    收集細胞沉淀;

    5)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻;按傳代比例進行接種傳代,然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);

    6)待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后,培養(yǎng)觀察,用于實驗;之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

    四、注意事項

    1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個月。

    2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。

    3. 消化過程中,胰酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。

    4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和技術部溝通;由于運輸的原因,個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。

    5. 該細胞只可用于科研。

    特殊注意事項

    6. 此細胞為懸浮細胞,請注意不要直接倒掉,造成損失;懸浮細胞因多數胞體較小,離心收集時,請注意懸液中細胞是否收集完全,可適當加大離心轉速200轉或增加離心時間3-5min,增加細胞獲取量。

    備注:由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實驗室參考
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