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細(xì)胞簡介:
雞主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自主動(dòng)脈組織;主動(dòng)脈是體循環(huán)的動(dòng)脈主干。其運(yùn)行路徑為:升主動(dòng)脈起于左心室,至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動(dòng)脈弓,弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動(dòng)脈;在第12胸椎體高度穿膈的主動(dòng)脈裂孔移行為腹主動(dòng)脈,以上為胸主動(dòng)脈,至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動(dòng)脈;髂總動(dòng)脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動(dòng)脈。主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,高低起伏;細(xì)胞密度低時(shí),常交織成網(wǎng)狀;密度高時(shí),則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞在心血管疾病發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用,以主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,探討心血管疾病相關(guān)發(fā)病機(jī)制是目前研究的熱點(diǎn);體外培養(yǎng)的主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
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方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的雞主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。
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質(zhì)量檢測:
實(shí)驗(yàn)室分離的雞主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
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培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào) P24441 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣 傳代特性 可傳3代左右 消化液 0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 雞主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三、使用方法
人外周血淋巴細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈圓形,在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞不增殖;不傳代;建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 懸浮細(xì)胞處理
1)收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中,用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次,收集清洗液;
2)1200-1500rpm離心3min,棄上清,收集細(xì)胞沉淀;
3)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞;將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4)若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大,無法機(jī)械吹散時(shí),向步驟2)中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中,用吸-管輕輕吹打混勻,37℃溫浴2-3min,消化結(jié)束后,加入胰
酶抑制劑(或血清)終止消化,用吸管輕輕吹打,分散細(xì)胞;1200rpm離心5min,棄上清,
收集細(xì)胞沉淀;
5)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻;按傳代比例進(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
6)待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,培養(yǎng)觀察,用于實(shí)驗(yàn);之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 消化過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。
特殊注意事項(xiàng)
6. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,請(qǐng)注意不要直接倒掉,造成損失;懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小,離心收集時(shí),請(qǐng)注意懸液中細(xì)胞是否收集完全,可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時(shí)間3-5min,增加細(xì)胞獲取量。
備注:由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考