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細(xì)胞簡介:
雞滑膜細(xì)胞分離自滑膜組織;滑膜組織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu),各種關(guān)節(jié)內(nèi)疾病均會(huì)累及滑膜。而滑膜細(xì)胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),同時(shí)在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位。骨關(guān)節(jié)炎(OA)以關(guān)節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣鳎洳±砀淖兝奂瓣P(guān)節(jié)的各個(gè)組成部分,但絕不僅局限于軟骨,還包括軟骨下骨、滑膜、半月板和韌帶。各組成部分的病理改變相互影響,相互作用,共同加速關(guān)節(jié)的退變。滑膜細(xì)胞是構(gòu)成滑膜層的最大細(xì)胞群體,是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),它包埋在顆粒狀無定性的基質(zhì)中,基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布。滑膜由A型(巨噬樣滑膜細(xì)胞)、B型(成纖維樣滑膜細(xì)胞)以及C型(樹突細(xì)胞樣滑膜細(xì)胞)細(xì)胞組成;ぜ(xì)胞主要功能:①滑膜細(xì)胞產(chǎn)生潤滑液成分,并且與關(guān)節(jié)腔的吸收和血液/潤滑液交換有關(guān);②滑膜細(xì)胞增生,表現(xiàn)為不依賴于支持物生長,并且分泌大量的效應(yīng)分子來促進(jìn)炎癥和關(guān)節(jié)損壞;③是自身自分泌和旁分泌網(wǎng)絡(luò)中效應(yīng)因子的一部分。
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方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的雞滑膜細(xì)胞采用混合酶消化法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。
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質(zhì)量檢測:
實(shí)驗(yàn)室分離的雞滑膜細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
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培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào) P24446 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣 傳代特性 可傳3代左右 消化液 0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 雞滑膜細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三、使用方法
人外周血淋巴細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)呈圓形,在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下,細(xì)胞不增殖;不傳代;建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 懸浮細(xì)胞處理
1)收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中,用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次,收集清洗液;
2)1200-1500rpm離心3min,棄上清,收集細(xì)胞沉淀;
3)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞;將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
4)若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大,無法機(jī)械吹散時(shí),向步驟2)中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中,用吸-管輕輕吹打混勻,37℃溫浴2-3min,消化結(jié)束后,加入胰
酶抑制劑(或血清)終止消化,用吸管輕輕吹打,分散細(xì)胞;1200rpm離心5min,棄上清,
收集細(xì)胞沉淀;
5)加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基,用吸管輕輕吹打混勻;按傳代比例進(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng);
6)待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后,培養(yǎng)觀察,用于實(shí)驗(yàn);之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 消化過程中,胰酶消化時(shí)間不宜過長,否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和技術(shù)部溝通;由于運(yùn)輸?shù)脑,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,詳盡告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。
特殊注意事項(xiàng)
6. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,請(qǐng)注意不要直接倒掉,造成損失;懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小,離心收集時(shí),請(qǐng)注意懸液中細(xì)胞是否收集完全,可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時(shí)間3-5min,增加細(xì)胞獲取量。
備注:由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考