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細(xì)胞簡介：
豬腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腦組織；腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是血腦屏障的主要組成成分，它是組成腦微血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞，能夠限制可溶性物質(zhì)和細(xì)胞等從血液進(jìn)入大腦，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與外周內(nèi)皮細(xì)胞相比具有一些相同特性。它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對(duì)維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在腦血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。與外周內(nèi)皮細(xì)胞相同，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)細(xì)胞粘附分子，調(diào)控白細(xì)胞進(jìn)入大腦。由于微血管內(nèi)皮細(xì)胞的器官特異性，內(nèi)皮細(xì)胞通常取源于疾病研究的相關(guān)組織。其主要特征如下：①腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞存在許多細(xì)胞間緊密連接，產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗，延遲細(xì)胞旁的通量；②腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺乏內(nèi)皮細(xì)胞的窗孔結(jié)構(gòu)，其液相物質(zhì)胞飲水平較低；③腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有不對(duì)稱定位酶和載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，從而產(chǎn)生“兩極分化”的表現(xiàn)型。
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方法簡介：
實(shí)驗(yàn)室分離的豬腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、最后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10⁵cells/瓶。
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質(zhì)量檢測(cè)：
實(shí)驗(yàn)室分離的豬腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
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培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）或明膠（0.1%） 培養(yǎng)基 基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào) P24476 換液頻率 每2-3天換液一次 生長特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性 可傳2-3代 消化液 0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 豬腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三、使用方法
人外周血淋巴細(xì)胞是一種懸浮細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈圓形，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞不增殖；不傳代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 懸浮細(xì)胞處理
1）收集T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50mL離心管中，用PBS清洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液；
2）1200-1500rpm離心3min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀；
3）加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細(xì)胞；將分散好的細(xì)胞調(diào)整合適密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4）若遇到懸浮細(xì)胞團(tuán)塊較大，無法機(jī)械吹散時(shí)，向步驟2）中細(xì)胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻，37℃溫浴2-3min，消化結(jié)束后，加入胰
酶抑制劑(或血清）終止消化，用吸管輕輕吹打，分散細(xì)胞；1200rpm離心5min，棄上清，
收集細(xì)胞沉淀；
5）加入5mL新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻；按傳代比例進(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
6）待細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察，用于實(shí)驗(yàn)；之后再按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請(qǐng)注意保持無菌操作。
3. 消化過程中，胰酶消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑�，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
5. 該細(xì)胞只可用于科研。
特殊注意事項(xiàng)
6. 此細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意不要直接倒掉，造成損失；懸浮細(xì)胞因多數(shù)胞體較小，離心收集時(shí)，請(qǐng)注意懸液中細(xì)胞是否收集完全，可適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時(shí)間3-5min，增加細(xì)胞獲取量。
備注：由于實(shí)驗(yàn)所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同，以上方法僅供各實(shí)驗(yàn)室參考
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