一 、產(chǎn)品詳情
傳代方法 | 1:2~1:4傳代,每2~3天傳代或換液一次。 | 凍存條件 | 細(xì)胞庫無血清凍存液 |
細(xì)胞株構(gòu)建流程
| 1.1.構(gòu)建目的基因過表達(dá)慢病毒重組質(zhì)粒,并包裝慢病毒;
2.慢病毒以合適的MOI值轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞;
3.用最佳濃度藥物對細(xì)胞株進(jìn)行篩選,獲得混合穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株;
4.穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株質(zhì)檢(COA)。 | ||
細(xì)胞備注 | 如混合穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株帶抗性基因,建議每傳8~10代用相應(yīng)抗性藥物篩選一次(6μg/mL);或在細(xì)胞培養(yǎng)過程中添加適當(dāng)濃度的抗性藥物以維持細(xì)胞株陽性率(0.6μg/mL)。 |
二、細(xì)胞到貨處理
常溫到貨細(xì)胞:T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶寄送活細(xì)胞(細(xì)胞處于培養(yǎng)液中)的處理方法
1.觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系。
2.用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。若因運(yùn)輸問題,部分貼壁細(xì)胞從瓶壁脫落,先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2~4小時,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3.靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài),如有異常現(xiàn)象,例如污染,細(xì)胞狀態(tài)差等,請拍照留證并及時與技術(shù)支持聯(lián)系。
4.僅留適量細(xì)胞培養(yǎng)液(棄去多余),然后將細(xì)胞置于37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
5.根據(jù)細(xì)胞習(xí)性及時換液、傳代、凍存細(xì)胞。
凍存管寄送活細(xì)胞(細(xì)胞處于全血清中)的處理方法:
1.用75%酒精徹底消毒細(xì)胞凍存管,然后在超凈工作臺將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15mL無菌離心管,500g,室溫離心5min。
2.棄血清,用完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀。
3.將細(xì)胞接種于合適的細(xì)胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶,然后置于37°C,5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
4.次日觀察細(xì)胞形態(tài),如有異常現(xiàn)象,例如污染,細(xì)胞狀態(tài)差等,請拍照留證并及時與技術(shù)支持聯(lián)系。
5.根據(jù)細(xì)胞習(xí)性及時換液、傳代、凍存細(xì)胞。
干冰運(yùn)輸細(xì)胞
1.將細(xì)胞從干冰中取出后立即置于37°C水浴,輕輕轉(zhuǎn)動凍存管,直至管內(nèi)細(xì)胞完全融化(最好在1~2min內(nèi)解凍)。
2.將凍存管轉(zhuǎn)移到超凈工作臺,用75%酒精徹底消毒凍存管。
三、細(xì)胞培養(yǎng)
1、細(xì)胞復(fù)蘇將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中快速搖晃至溶解,然后在超凈工作臺將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至15mL無菌離心管,加入4mL培養(yǎng)基或無菌PBS混合均勻,室溫,500g,離心5min,棄上清液,用完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,將細(xì)胞移入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿培養(yǎng),第二天更換培養(yǎng)液并檢查細(xì)胞生長情況。
2、細(xì)胞傳代
貼壁細(xì)胞傳代:當(dāng)細(xì)胞密度約80%時,可進(jìn)行傳代培養(yǎng):吸出原培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基,PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次,加2~3mL0.25%胰酶進(jìn)行消化(注意根據(jù)實際情況,把握消化時間)。
鏡下觀察消化情況,在細(xì)胞邊緣縮小,貼壁松動時(可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細(xì)胞層某處,即可肉眼可見細(xì)胞層脫落,或吹打后鏡下觀察吹打處,即消化完成,否則繼續(xù)消化)直接吸掉胰酶,加3~4mL完全培養(yǎng)基,輕輕吹打細(xì)胞層,把細(xì)胞層吹落,吹散。取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿中,添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基,把細(xì)胞懸液打勻,于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
懸浮細(xì)胞傳代:當(dāng)細(xì)胞密度約80%時,可進(jìn)行傳代培養(yǎng):直接將原培養(yǎng)液和細(xì)胞一起轉(zhuǎn)移至15mL或50mL無菌離心管,400~500g室溫離心5min,吸掉培養(yǎng)基,用新鮮完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞生長特性,按合適比例傳代細(xì)胞,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶,將細(xì)胞置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3、細(xì)胞凍存收集細(xì)胞,500g,離心5min,棄上清液,加入無血清凍存液輕輕懸浮細(xì)胞,移入凍存管后進(jìn)行凍存。
使用須知
1.本產(chǎn)品僅供購買方單方使用,不得向任何第三方贈送、轉(zhuǎn)讓或銷售;
2.本產(chǎn)品僅供實驗室和體外研究使用,不能用于任何臨床檢驗、診斷、治療,或任何非法用途;
3.收貨48h內(nèi)如若發(fā)現(xiàn)異常,請及時聯(lián)系售后,逾期視為收貨良好;
4.請嚴(yán)格按照本說明書操作,否則造成細(xì)胞失活等情形,不予提供補(bǔ)發(fā)服務(wù)。