傳代方法	第一次建議1:2傳代	凍存條件	細(xì)胞庫(kù)無(wú)血清凍存液
細(xì)胞描述	PC-12(未分化）細(xì)胞正常生長(zhǎng)狀態(tài)為懸浮聚團(tuán)，若用NGF誘導(dǎo)時(shí)，需要使用多聚-L-賴氨酸溶液包被培養(yǎng)瓶后促使細(xì)胞貼壁。 該細(xì)胞系來(lái)自能移植的雄性大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤。這些細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)受體。NGF可誘導(dǎo)產(chǎn)生神經(jīng)表型。這些細(xì)胞不合成腎上腺素。 1、未分化、低分化和高分化的區(qū)別：未分化的PC-12從形態(tài)上看是圓形的，聚團(tuán)生長(zhǎng)的漂浮細(xì)胞；低分化的成多角形，有較短的突起；高分化的細(xì)胞有多個(gè)突起，突起數(shù)目不等，突觸較長(zhǎng)，類似神經(jīng)元軸突。 2、低分化和高分化是在未分化的PC-12基礎(chǔ)上誘導(dǎo)產(chǎn)生的，低分化和高分化指的與神經(jīng)細(xì)胞表型的相似程度，高分化更接近神經(jīng)細(xì)胞表型。 本庫(kù)的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。
培養(yǎng)備注	1.PC-12(Undifferentiated)細(xì)胞正常生長(zhǎng)狀態(tài)為懸浮聚團(tuán)，若需要用NGF誘導(dǎo)時(shí)，需要使用多聚-L-賴氨酸溶液（貨號(hào) PB180523）包被培養(yǎng)瓶后促使細(xì)胞貼壁。2.Undifferentiated、Low differentiation和High differentiation的區(qū)別：Undifferentiated的PC-12從形態(tài)上看是圓形的，聚團(tuán)生長(zhǎng)的漂浮細(xì)胞；Low differentiation的成多角形，有較短的突起；High differentiation的細(xì)胞有多個(gè)突起，突起數(shù)目不等，突觸較長(zhǎng)，類似神經(jīng)元軸突。3.Low differentiation和High differentiation是在Undifferentiated的PC-12基礎(chǔ)上誘導(dǎo)產(chǎn)生的，Low differentiation和High differentiation指的與神經(jīng)細(xì)胞表型的相似程度，High differentiation更接近神經(jīng)細(xì)胞表型。

細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a）、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

三、細(xì)胞凍存：（注：非無(wú)血清凍存液方法，無(wú)血清凍存液方法請(qǐng)參考我司官網(wǎng)貨號(hào)：C7001）

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃。