產(chǎn)品及特點	枯草桿菌 WB800N　是芽胞桿菌屬的一種，屬于分泌型宿主菌，常被用于基因表達(dá)。本產(chǎn)品具有新霉素（neomycin）抗性。其基因型如下：nprE aprE epr bpr mpr :: ble nprB　:: bsr vpr wprA　:: hyg cm :: neo; NeoR 。
規(guī)格及成分		成份	編號	塑料袋包裝
		枯草桿菌 WB800N	12-118	1 mL
		使用手冊	1 份
運輸及保存	低溫運輸，-80℃保存，有效期一年。
自備試劑	LB 培養(yǎng)基、山梨醇、甘露醇、甘油、超純水等
使用方法	質(zhì)粒轉(zhuǎn)化枯草桿菌的方法有很多，如電轉(zhuǎn)化、Spizizen 　轉(zhuǎn)化、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化等。根據(jù)實驗方法的不同，用的試劑和培養(yǎng)基有所不同。本手冊提供一個電轉(zhuǎn)化方法。 1.　準(zhǔn)備所需試劑與耗材： 1)　配制 40　mL（LB+0.5　M　山梨醇）:蛋白胨 10　g/L，酵母粉 5g/L， NaCl　10　g/L，3.6g　山梨醇 pH=7.2。 2)　200　mL　電轉(zhuǎn)培養(yǎng)基（0.5　M　山梨醇，0.5　M　甘露醇，10%甘油）： 18g 山梨醇，18.5g 甘露醇，20 mL 甘油。 3)10　mL　RM（0.5M 山梨醇，0.38M　甘露醇）：0.9g　山梨醇，0.7g 甘露醇。 4)2 個 50mL　離心管，滅菌。 2.　接種枯草桿菌 WB800N　于 3　mL　的 LB 培養(yǎng)基中，過夜培養(yǎng)。 3.　取 2.6　mL　過夜培養(yǎng)物接入 40　mL（LB+0.5　M　山梨醇）中，37℃，200 rpm 培養(yǎng)至 OD600=0.85~0.95。 4.　將菌液冰水浴 10　分鐘，然后 5000g，4℃離心 5　分鐘收集菌體。 5.　用 50　mL　預(yù)冷的電轉(zhuǎn)培養(yǎng)基（0.5　M　山梨醇，0.5　M　甘露醇，10%甘油），　重新吹懸菌體，5000g，4℃離心 5　分鐘去上清，如此漂洗 4　次。 6.　將洗滌后的菌體吹懸于 1　mL　電轉(zhuǎn)培養(yǎng)基中，每 EP　管分裝 60　μL。 7.　將 60　μL　感受態(tài)細(xì)胞中加入 50　ng　DNA（1~8　μL），冰上孵育 2　分鐘， 加入預(yù)冷的電轉(zhuǎn)杯（1　mm）中，電擊一次。電轉(zhuǎn)儀設(shè)置：2.0　kv，1　mm， 電擊 1　次。（電擊結(jié)果：時間常數(shù)=4.5~5.0　　ms，如果時間常數(shù)<4.2， 則需要增加電轉(zhuǎn)培養(yǎng)基的漂洗次數(shù)或者提高感受態(tài)的稀釋倍數(shù)來獲得更 高的轉(zhuǎn)化效率。）

　

　

8.電擊完畢取出杯子并立即加入 1　mL　RM（LB+0.5　M　山梨醇+0.38　M　甘 露醇），37℃，200 rpm，復(fù)蘇 3 小時后，涂板。37℃，過夜培養(yǎng)。

LB　　　　培養(yǎng)基（　CAT#:100602　）　、 山梨醇（　CAT#:87-79-6　）、 甘露醇　 （CAT#:69-65-8）、甘油（CAT#:56-81-5）、超純水（CAT#:100935）