用于通過(guò)酶免疫測(cè)定法定量測(cè)定人唾液中的皮質(zhì)醇。僅供研究使用。不用于診斷程序。

皮質(zhì)醇ELISA(唾液)（11-CORHU-E01-SLV）檢測(cè)原理：

皮質(zhì)醇唾液ELISA是一種競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品中存在的皮質(zhì)醇與酶標(biāo)記的抗原（HRP結(jié)合物）在微孔板上的有限數(shù)量的抗皮質(zhì)醇抗體結(jié)合位點(diǎn)之間發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)。經(jīng)過(guò)洗滌步驟去除未結(jié)合的物質(zhì)后，添加TMB（酶）底物，并與HRP反應(yīng)形成與存在的皮質(zhì)醇量成反比的藍(lán)色產(chǎn)物。孵育后，通過(guò)添加終止液終止酶反應(yīng)，顏色由藍(lán)變黃。在450nm處的微孔板讀取器上測(cè)量吸光度。使用一組校準(zhǔn)品繪制校準(zhǔn)曲線，從而可以直接讀取樣品和對(duì)照品中的皮質(zhì)醇量。

樣品收集和儲(chǔ)存：

避免在吃正餐后1小時(shí)內(nèi)或在飲酒后12小時(shí)內(nèi)收集樣本。酸性或高糖食物可能會(huì)通過(guò)降低樣品pH值和影響細(xì)菌生長(zhǎng)來(lái)影響測(cè)定性能。為了盡量減少這些因素，在收集樣本前10分鐘徹底漱口。不要使用血液污染的樣本。

每份重復(fù)測(cè)定需要大約1毫升唾液。在收集樣本前10分鐘徹底漱口。在不用力或誘導(dǎo)的情況下，將4-5毫升唾液收集到一個(gè)干凈的玻璃管中（可以使用Sarstedt的Salivette）。唾液樣本可以在2-8°C下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)24小時(shí)，或者在分析將在以后進(jìn)行的情況下，儲(chǔ)存在-10°C或更低的溫度下。處理時(shí)，將所有人類(lèi)樣本視為可能的生物危害物質(zhì)，并采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施。

皮質(zhì)醇ELISA(唾液)樣品預(yù)處理和儲(chǔ)存：

收集后，必須按照以下程序?qū)�樣本進(jìn)行預(yù)處理：

1. 將樣本冷凍至少2小時(shí)。

2. 解凍樣本。

3. 使用漩渦混合器混合并離心樣本10分鐘，速度為2000x g。

4. 小心地移除上清液，并轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的標(biāo)記管中。上清液將在測(cè)試的測(cè)定程序中使用。

校準(zhǔn)品和試劑盒對(duì)照品不需要預(yù)處理；它們是以即用格式提供的。

將預(yù)處理后的唾液樣本儲(chǔ)存在2-8°C下長(zhǎng)達(dá)24小時(shí)，或者如果分析將在以后進(jìn)行，則冷凍在-10°C或更低的溫度下。儲(chǔ)存的樣本在使用前應(yīng)檢查以確保不含沉淀物。如果有沉淀物，按照樣本預(yù)處理部分的步驟3-4進(jìn)行操作。處理時(shí)，將所有人類(lèi)樣本視為可能的生物危害物質(zhì)。

質(zhì)量控制：

在評(píng)估測(cè)試結(jié)果的有效性時(shí)，應(yīng)評(píng)估以下標(biāo)準(zhǔn)：

1. 最高濃度的校準(zhǔn)品達(dá)到QC證書(shū)中所述的%結(jié)合可接受范圍。%結(jié)合 = （校準(zhǔn)品的OD/校準(zhǔn)品A的OD）x 100。

2. 試劑盒對(duì)照品獲得的值在QC證書(shū)中所述的可接受范圍內(nèi)。

3. 使用的任何外部對(duì)照品的結(jié)果符合可接受的范圍。

皮質(zhì)醇ELISA(唾液)測(cè)定程序：

注意：所有將要測(cè)試的樣品在使用前必須經(jīng)過(guò)預(yù)處理。（參見(jiàn)“樣品預(yù)處理和儲(chǔ)存”部分）。校準(zhǔn)品和試劑盒對(duì)照品不需要預(yù)處理，因?yàn)樗鼈兪羌从眯偷摹?/span>

所有試劑和樣品在使用前必須達(dá)到室溫，并輕輕倒置混合。校準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品應(yīng)以雙份進(jìn)行測(cè)定。一旦開(kāi)始程序，所有步驟都應(yīng)不間斷地完成。

1. 準(zhǔn)備1X工作溶液的HRP結(jié)合物和洗滌緩沖液。

2. 從微孔板框架中取出將要使用的微孔條數(shù)量，并將其放回帶有干燥劑的袋子中。重新密封袋子，并將任何未使用的條放回冰箱。

3. 將每個(gè)校準(zhǔn)品、對(duì)照品和樣品的50 ?L分別準(zhǔn)確移液到預(yù)先確定的孔中，并進(jìn)行雙份測(cè)定。

4. 向每個(gè)孔中加入100 μL的1X工作HRP結(jié)合物溶液。（建議使用多通道移液器。）

5. 在室溫下，使用微孔板振蕩器（軌道振蕩器（直徑3mm）設(shè)置為600轉(zhuǎn)/分鐘或往復(fù)振蕩器（行程長(zhǎng)度1.5”）設(shè)置為每分鐘180次振蕩）孵育45分鐘。

6. 使用自動(dòng)微孔板洗滌器（首選）或按以下說(shuō)明手動(dòng)洗滌微孔板：

自動(dòng)：使用自動(dòng)微孔板洗滌器，進(jìn)行3周期洗滌，每個(gè)孔使用300 μL的1X工作洗滌緩沖液（3 x 300 μL）。一個(gè)周期包括抽吸所有孔，然后用300 μL的1X工作洗滌緩沖液填充所有孔。在最后一次洗滌周期后，抽吸所有孔，然后用力將微孔板拍在吸水紙上以去除殘留液體。

手動(dòng)：手動(dòng)洗滌時(shí)，進(jìn)行3周期洗滌，每個(gè)孔使用300 μL的1X工作洗滌緩沖液（3 x 300 μL）。一個(gè)周期包括通過(guò)將孔的內(nèi)容迅速排空到廢液容器中來(lái)抽吸所有孔，然后使用多通道移液器向每個(gè)孔中移液300 μL的1X工作洗滌緩沖液。在最后一次洗滌周期后，通過(guò)將內(nèi)容迅速排空到廢液容器中來(lái)抽吸所有孔，然后用力將微孔板拍在吸水紙上以去除殘留液體。

7. 向每個(gè)孔中加入150 μL的TMB底物（建議使用多通道移液器）。

8. 在室溫下，使用微孔板振蕩器（軌道振蕩器（直徑3mm）設(shè)置為600轉(zhuǎn)/分鐘或往復(fù)振蕩器（行程長(zhǎng)度1.5”）設(shè)置為每分鐘180次振蕩）孵育15-20分鐘。

9. 向每個(gè)孔中加入50 μL的終止液（建議使用多通道移液器），按照添加TMB底物時(shí)相同的順序和速度。輕輕拍打微孔板框架以混合孔中的內(nèi)容。

10. 在添加終止液后20分鐘內(nèi)，使用設(shè)定為450 nm的吸光度微孔板讀取器測(cè)量光密度（吸光度）。

典型表格數(shù)據(jù)：

僅樣本數(shù)據(jù)。不用于計(jì)算結(jié)果。