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發(fā)布時間:2024/10/15 9:06:08 閱讀次數(shù):263
【產(chǎn)品名稱】
通用名:雞禽流感病毒IgG抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Avian Influenza Virus (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T/盒
ELISA【預期用途】 禽流感(Avian influenza,AI)是目前危害國內(nèi)養(yǎng)禽業(yè)的一種急性接觸性病毒性傳染病。疫苗免疫是預防和控制禽流感發(fā)生的最有效途徑,而免疫后抗體水平的高低反映實際的疫苗免疫效果,直接關系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力。
本試劑盒適用于不同品種、不同日齡雞的血清中禽流感病毒特異性抗體的檢測?捎糜谇萘鞲校ㄈ《荆┮呙缑庖咝Чu價、免疫時間的確定分析、地區(qū)雞群禽流感免疫狀況評價等。
【原 理】
本試劑盒系由預包被禽流感病毒(AIV)重組抗原的微孔板和酶標記二抗及其他配套試劑組成,應用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測雞血清或血漿中禽流感病毒特異性抗體。實驗時,在包被板中加入對照血清和稀釋的待檢血清,經(jīng)溫育后,若樣品中含有禽流感病毒的特異性抗體,則將與包被板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標二抗,與包被板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,在孔中加TMB底物液,與酶反應形成藍色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關;加入終止液終止反應后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,即可知樣品是否含有特異性抗體。
【儲存及有效期】
于2~8℃避光保存,有效期為12個月。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,使用期限為1個月。
【試劑盒組成】
1. | 禽流感病毒抗原預包被微孔板條 | 96T×1 |
2. | 酶標記物 (紅蓋) | 11ml×1 |
3. | 樣品稀釋液 (黃蓋) | 50ml×1 |
4. | 20X濃縮洗滌液 (透明蓋) | 40ml×1 |
5. | 底物液A (白蓋) | 7ml×1 |
6. | 底物液B (黑蓋) | 7ml×1 |
7. | 終止液 (黃蓋) | 7ml×1 |
8. | 陽性對照 (紅蓋,已滅活) | 0.5 ml×1 |
9. | 陰性對照 (綠蓋,已滅活) | 0.5 ml×1 |
10. | 蓋板膜 | 1張 |
11. | 自封袋 | 1個 |
12. | 說明書 | 1份 |
【樣品制備】 取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品短期可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
【樣品稀釋】 用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋(如5μl血清加入495μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫(25℃左右),并搖動使沉淀的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【試驗操作方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復至室溫。
2.取所需用量微孔板條,設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰性/陽性對照孔分別加入陰性/陽性對照血清100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣品100μl。
4.混勻,置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調(diào)零,于450nm(630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A450)。
【結(jié)果判定】
1.陰性對照:正常情況下,陰性對照孔A值≤0.10;
2.陽性對照:正常情況下,陽性對照孔A值≥0.6;
3.臨界值(C.O)的計算:C.O=0.13+陰性對照孔均值(陰性對照孔均值低于0.07時以0.07計算);
4.結(jié)果判定:樣品A值≥C.O為陽性;樣品A值<C.O為陰性。
ELISA試劑盒【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中禽流感病毒IgG抗體,根據(jù)A值高低可作抗體水平強、中、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋,未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶,使用時需恢復至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
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