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發(fā)布時(shí)間:2023/4/17 9:22:48 閱讀次數(shù):378
SW1417人結(jié)腸腺癌細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)
一 細(xì)胞培養(yǎng)條件
中文名稱(chēng) | 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 | 英文名稱(chēng) | SW1417 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) | 凍存條件 | 無(wú)血清凍存液 |
培養(yǎng)體系 | DMEM+10%FBS | ||
傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 傳代情況 | 2天換液 |
備注 | 用無(wú)菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基,留作過(guò)渡培養(yǎng) |
二 細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法.收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開(kāi)外包裝,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí).鏡下觀(guān)察:未超過(guò)80%匯合度時(shí),可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃ 5%CO2孵箱培養(yǎng);超過(guò)80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟.(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話(huà),放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松)
三 細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻.在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻.然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過(guò)夜.第二天換液并檢查細(xì)胞密度.
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng).
1 對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣 鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次.
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化.
3.輕輕吹打細(xì)胞,完全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻.
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中.
PS:若客戶(hù)收到2ml小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無(wú)菌操作;將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度:若密度未超過(guò)80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存.若密度超過(guò)80%,可直接進(jìn)行傳代(方法同上).
SW1417人結(jié)腸腺癌細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)
3)細(xì)胞凍存:
1 細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;2 添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀(guān)察,待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3 用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;
4 先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃.
四 售后服務(wù)告知書(shū)
1)細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?
1. 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問(wèn)題,細(xì)胞丟失 瓶身破損 培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā);
2. 細(xì)胞污染問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品48小時(shí)內(nèi),給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,核實(shí)后重發(fā);
3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時(shí)后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,(需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片),重發(fā);
4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時(shí)后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時(shí)候并且未開(kāi)封,出現(xiàn)污染,重發(fā);
5. 細(xì)胞活性問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,核實(shí)后予重發(fā);
6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請(qǐng)拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格.4-7天內(nèi)出現(xiàn)問(wèn)題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā).技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價(jià)的50%收費(fèi)重發(fā).
二)細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
1. 客戶(hù)造成細(xì)胞污染,不重發(fā);
2. 客戶(hù)不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
3. 非本庫(kù)推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理的,不重發(fā);
6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);
7. 視具體情況而定.
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