發(fā)布時間：2023/4/24 10:35:26 閱讀次數(shù)：704
固氮酶（NITS）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用.
檢測范圍： 96T
25ng/L -850 ng/L
使用目的：
本試劑盒用于測定土壤樣本中固氮酶（NITS）含量.
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中固氮酶（NITS）水平.用純化的固氮酶（NITS）抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入固氮酶（NITS）,再與HRP標記的固氮酶（NITS）抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色.顏色的深淺和樣品中的固氮酶（NITS）呈正相關(guān).用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,通過標準曲線計算樣品中固氮酶（NITS）濃度.
試劑盒組成
| 1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品（1600 ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗.若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性.
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋.
| 800ng/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 400 ng/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 200ng/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 100ng/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 50ng/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同） 標準孔 待測樣品孔.在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）.加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻.
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘.
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干.
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外.
7. 溫育：操作同3.
8. 洗滌：操作同5.
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）.
11. 測定：以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）. 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行.
操作程序總結(jié)：
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度.
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存.
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果.
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差.一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣.
4． 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復(fù)孔.如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值）,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）.
5． 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.
6．底物請避光保存.
7．嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理.
9．本試劑不同批號組分不得混用.
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃.
2．有效期：6個月
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