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發(fā)布時間:2023/4/26 9:48:13 閱讀次數:406
人胸苷激酶1(TK1)酶聯免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用.
檢測范圍: 96T
16U/L-600U/L
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清 血漿及相關液體樣本中胸苷激酶1(TK1)活性.
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人胸苷激酶1(TK1)水平.用純化的人胸苷激酶1(TK1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入胸苷激酶1(TK1),再與HRP標記的胸苷激酶1(TK1)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色.顏色的深淺和樣品中的胸苷激酶1(TK1)呈正相關.用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人胸苷激酶1(TK1)活性濃度.
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品(1200U/L) | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗.若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性.
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋.
600U/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
300U/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
150U/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
75U/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
37.5U/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 標準孔 待測樣品孔.在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍).加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻.
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘.
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干.
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外.
7. 溫育:操作同3.
8. 洗滌:操作同5.
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色).
11. 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值). 測定應在加終止液后15分鐘以內進行.
操作程序總結:
計算
以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度.
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存.
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果.
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差.一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣.
4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔.如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5).
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.
6.底物請避光保存.
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理.
9.本試劑不同批號組分不得混用.
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃.
2.有效期:6個月
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