本試劑盒是用于質(zhì)粒DNA小量制備與純化的試劑盒。菌體先經(jīng)堿裂解法處理, 再通過離心吸附柱,專一結(jié)合DNA,最后洗去雜質(zhì),高效快速提取質(zhì)粒DNA,全套操作可以在30分鐘之內(nèi)完成。其操作流程如下:
使用本試劑盒可從1-5 mL過夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá)20 μg的高純度質(zhì)粒DNA(OD260/OD280 = 1.8-2.0),可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序及PCR等。
1. 快速、步驟少,整個(gè)操作在半個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成。
2. 不需要預(yù)平衡離心吸附柱。
3. 洗柱液即開即用,不需要額外加乙醇。
4. 純度高,采用本試劑盒提取的質(zhì)粒OD比值在1.8-2.0之間。
5. 產(chǎn)量高,每毫升過夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到2-5 μg/mL。
6. 用途廣,適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。
7. 價(jià)格低,比多數(shù)國(guó)內(nèi)同類產(chǎn)品的價(jià)格更便宜。
在1.5 mL離心管收集1-4 mL過夜培養(yǎng)飽和菌液,離心1分鐘,用和0.25 mL溶液A重懸沉淀,再與0.25 mL溶液B混勻,再加入0.35 mL溶液C,混勻,室溫靜止2分鐘,離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到DNA純化柱中,靜置2分鐘,離心1分鐘,棄收 集管中的廢液,加入0.5 mL的通用洗柱液,離心1分鐘,棄廢液,重復(fù)上一步1次。離心1分鐘,甩干殘留液體,將DNA純化柱置于新的1.5 mL離心管(自備)中,加入適量(30—100 μL)DNA洗脫液離心即得質(zhì)粒DNA。