胃蛋白酶原由胃底主細(xì)胞分泌,在PH 1.5-5.0條件下,被活化成胃蛋白酶,將蛋白質(zhì)分解為胨,一部分被分解為酷氨酸、苯丙酸等氨基酸。胃液胃蛋白酶測(cè)定可用于鑒別神經(jīng)性低酸癥和胃性低酸癥,當(dāng)胃酸過(guò)少或缺乏時(shí),前者胃蛋白酶的含量有時(shí)正常而后者鹽酸與胃蛋白酶同時(shí)缺乏。一般認(rèn)為胃性低酸癥是由于胃粘膜的重癥器質(zhì)性變化所致,研究具有重要的參考意義。胃癌、萎縮性胃炎、慢性胃炎、慢性胃擴(kuò)張、慢性十二脂腸炎、惡性貧血以及甲狀腺功能減退等胃蛋白酶的分泌常減少。一般胃酸基礎(chǔ)分泌高的,如十二脂腸潰瘍等,胃蛋白酶活性增高。
胃蛋白酶可水解蛋白產(chǎn)生含酚的氨基酸,而酚試劑可被含酚的氨基酸還原成藍(lán)色物質(zhì),通過(guò)比色可測(cè)定胃蛋白酶活力。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放1個(gè)月有效。
2、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
3、回收試驗(yàn): X =104%。
4、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
5、測(cè)試范圍:可測(cè)動(dòng)物胃液、組織等。
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀(比色測(cè)定波長(zhǎng)為660nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
胃液: 先做預(yù)試,再根據(jù)活力大小進(jìn)行取樣操作
動(dòng)物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書。
操作流程:
1、按步驟加入樣本和R1、R2, 37℃準(zhǔn)確水浴10分鐘
2、測(cè)定管加入R1, 37℃水浴10分鐘,3500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘
3、取上清加R3、R4,37℃水浴20分鐘
4、660nm波長(zhǎng),1cm光徑,比色