注意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
Gu廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，不僅是組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸之一，而且通過(guò)轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來(lái)源之一。此外，Glu還是味精的主要有效成分，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn)。
測(cè)定原理：
利用專(zhuān)用提取液提取，然后用顯色劑進(jìn)行顯色，顯色后在570nm下進(jìn)行測(cè)定。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶， 4℃保存；臨用前加入10mL蒸餾水，充分混勻溶解，用不完的試劑仍 4℃保存。
谷氨酸提�。�
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞樣品：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議1000萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入2mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.2g組織，加入2mL試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）或細(xì)胞培養(yǎng)液樣品：按照血清（漿）或細(xì)胞培養(yǎng)液體積（mL）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議取0.2mL血清（漿）或者細(xì)胞培養(yǎng)液加入2mL試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 常溫離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟
分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至570nm，蒸餾水調(diào)零。
在有蓋EP管中加入下列試劑：
| 試劑名稱(chēng)（μL） | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
| 樣本 | 1000 |
|
| 試劑一 |
| 1000 |
| 試劑二 | 200 | 200 |
混勻，90℃水浴20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，于570nm波長(zhǎng)處比色，△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管。對(duì)照管只要做一管。
谷氨酸含量計(jì)算：
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 0.0074x- 0.5255；x為谷氨酸含量（µg/mL），y為吸光值。
2、按照血清（漿）或者細(xì)胞培養(yǎng)液體積計(jì)算
谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2）
=1351×(△A+0.5255)
3、按照蛋白濃度計(jì)算
谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)
=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr
4、按照樣本質(zhì)量計(jì)算
谷氨酸含量(µg/g鮮重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)
=270.2×(△A+0.5255) ÷W
5、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算
谷氨酸含量(μg/104 cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)
=0.27×(△A+0.5255)
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，1mL；V2：加入提取液體積，2 mL；V3：加入血清（漿）或細(xì)胞培養(yǎng)液體積，0.2 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；1000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，1000萬(wàn)。
注意：
1、該試劑盒僅適用于發(fā)酵液或組織中谷氨酸含量測(cè)定，檢測(cè)下限為100µg/mL。
2、標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為：100µg/mL -600µg/mL。
3、ΔA線性范圍為：0.01-2；若大于2則需要將上清液用試劑一稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
