氫氧自由基(OH-)是化學(xué)性質(zhì)最活潑的活性氧,它幾乎與細(xì)胞內(nèi)的每一類(lèi)有機(jī)物如糖、氨基酸、磷脂、核苷酸和有機(jī)酸等都能反應(yīng),并且有非常高的速度常數(shù),因此它的破壞性極強(qiáng),但它可以被過(guò)氧化氫酶分解,因而測(cè)定過(guò)氧化氫酶的高低就有其重要意義。
紅細(xì)胞或組織中過(guò)氧化氫酶(CAT)在一定條件下能直接分解其底物過(guò)氧化氫(H2O2),使H2O2在反應(yīng)液中的濃度逐漸降低,相應(yīng)的吸光度也逐漸下降。
所需儀器及自備試劑:
1、紫外分光光度計(jì)(比色測(cè)定波長(zhǎng)為240nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為25℃)
3、漩渦混勻器
4、微量移液器
操作流程:
1、20μl樣本加底物溶液3ml,240nm處測(cè)OD1
2、1分鐘后240nm處測(cè)OD2
3、根據(jù)說(shuō)明書(shū)計(jì)算公式得出CAT活力
注:最佳取樣量(具體摸索的方法按照試劑盒中說(shuō)明書(shū)要求)