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JM110感受態(tài)細(xì)胞

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  • 介紹: 基 因 型rpsL (Str R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacIqlacZΔM15]
  • 簡(jiǎn) 要 說 明
  • JM110菌株具有硫酸鏈霉素抗性(StrR) ;是甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株,提取得到的質(zhì)粒DNA,可被對(duì)dam、dcm甲基化敏感的內(nèi)切酶切割; lacIqlacZΔM15的存在使JM110可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選,但轉(zhuǎn)化效率不高,High5TM系列JM110感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,經(jīng)pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率約107 cfu/μg。一般不用于質(zhì)粒構(gòu)建,只適用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。
  • 操 作 說 明
  • 1.JM110感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中),加入目的DNA并用手撥打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。
  • 2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
  • 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
  • 4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
  • 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
  • 注 意 事 項(xiàng)
  • 1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化,融化后不可久放,八分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒,否則會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。
  • 2.混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
  • 3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?上鄳(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
  • 儲(chǔ)存條件: -80℃
  • 用途: 克隆感受態(tài)細(xì)胞
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