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S17-1 λpir 感受態(tài)細(xì)胞

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  • 介紹:

    基 因 型RP4-2(Km::Tn7,Tc::Mu-1), pro-82, LAMpir, recA1, endA1, thiE1, hsdR17, creC510 簡 要 說 明 S17-1菌株的染色體中整合了RP4-2質(zhì)粒,該質(zhì)粒可以攜帶染色體的部分DNA在接合菌株之間轉(zhuǎn)移。 S17- 1菌株缺失核酸內(nèi)切酶 (endA1),提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;同時(shí)為重組酶缺陷型 (recA1),減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA 的穩(wěn)定性。Tn7賦予該菌株弱的鏈霉素抗性。生物生產(chǎn)的S17-1感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>1×108 cfu/μg DNA。

  • 操 作 說 明

  • 1. S17-1感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì);蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

  • 2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

  • 3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

  • 4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

  • 5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)(12-15 h)。

  • 注 意 事 項(xiàng)

  • 1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過長,長時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

  • 2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì);蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

  • 儲(chǔ)存條件: -80℃
  • 用途: 克隆感受態(tài)細(xì)胞
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