- 操 作 說 明
- 1.EPI400感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中),加入目的DNA(質(zhì);蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。
- 2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
- 4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
- 注 意 事 項(xiàng)
- 1. 感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。
- 2. 混入質(zhì);蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
- 3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì);蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
- 儲(chǔ)存條件: -80℃
- 用途: 克隆感受態(tài)細(xì)胞
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