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土壤酸性轉化酶試劑盒微量法

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正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
土壤酸性轉化酶試劑盒微量法測定意義:
S-AI 在 pH 為 4.5~5.0(酸性)條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是土壤
微生物蔗糖代謝關鍵酶之一。
測定原理:
S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進一步與 3,5-二硝基水楊酸反應,生成棕紅色氨基化
合物,在 510nm 有特征光吸收,在一定范圍內(nèi) 510nm 光吸收增加速率與 AI 活性成正比。
自備用品:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、
冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用;用不完的試劑 4℃
保存;
試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃保存;
測定步驟和加樣表:
試劑名稱(μL) 測定管 對照管
風干土樣(g) 0.05 0.05
試劑一 400
試劑二 400
混勻, 37℃準確水浴 30min 后,95℃水浴 10min(蓋緊,以防水分散失),流水冷卻后
充分混勻(以保證濃度不變),10000g 25℃離心 10min,取上清液
上清液 200 200
試劑三 100 100
混勻,95℃水浴 10min(蓋緊,以防止水分散失),流水冷卻后充分混勻, 510nm 處,記錄
各管吸光值 A,如果吸光值大于 2,可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式中乘以相應稀釋倍
數(shù)),ΔA=A 測定-A 對照。
S-AI 活性計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0016x -0.001;x 為標準品濃度(μg/mL),y 為吸光值。
單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個 S-AI 活力單位。
S-AI 活力(mg/d /g 土樣)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V 反總÷W÷T ÷1000=240×(ΔA+0.001)
V 反總:反應體系總體積:0.4mL;T:反應時間,1/48d; W:樣本質(zhì)量,0.05g;1mg=1000μg。
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0008x -0.001;x 為標準品濃度(μg/mL),y 為吸光值。
單位的定義:每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個 S-AI 活力單位。
S-AI 活力(mg/d/g 土樣)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V 反總÷W÷T ÷1000=480×(ΔA+0.001)
V 反總:反應體系總體積:0.4mL;T:反應時間,1/48d; W:樣本質(zhì)量,0.05g;1mg=1000μg。
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