產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase是一種僅當(dāng)溫度高于45ºC時(shí)才具有DNA聚合酶活性的Taq DNA Polymerase(簡(jiǎn)稱Taq酶)與其可逆抑制劑的混合物，俗稱熱啟動(dòng)Taq酶或HS Taq酶。使用本產(chǎn)品進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)可以在室溫操作，并能有效避免室溫操作時(shí)由于普通Taq酶或其它耐熱DNA聚合酶存在活性而導(dǎo)致的非特異性PCR背景。

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase是Taq酶與其可逆性抑制劑的混合物。該抑制劑可以可逆性地結(jié)合于Taq酶活性位點(diǎn)，當(dāng)溫度低于45ºC時(shí)，形成非活性的Taq酶和抑制劑的復(fù)合物，從而抑制Taq酶的活性。在常規(guī)PCR反應(yīng)過程中，當(dāng)溫度升高至45ºC或以上時(shí)，Taq酶和其可逆性抑制劑解離，從而發(fā)揮其正常的DNA聚合酶活性。上述機(jī)制使Hot-Start Taq DNA Polymerase僅在加熱到45ºC或以上時(shí)才會(huì)有酶活性，從而確保了小于45ºC時(shí)不會(huì)發(fā)生非特異性的DNA聚合反應(yīng)，有效降低了PCR的非特異性背景，提高了PCR反應(yīng)的準(zhǔn)確性和精確性。

Ø 常規(guī)的DNA分離純化操作，例如PCR純化試劑盒或DNA凝膠回收試劑盒和乙醇沉淀等操作，都能有效去除本產(chǎn)品中的抑制劑，以避免可能的對(duì)于后續(xù)反應(yīng)的干擾。

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase使用時(shí)無需額外的高溫孵育步驟以釋放Taq酶活性。

Ø Hot-Start Taq DNA Polymerase和普通的Taq DNA Polymerase一樣，可以催化5'至3'方向的依賴于DNA模板的DNA的聚合反應(yīng)，沒有3'至5'的外切酶活性，最終會(huì)導(dǎo)致PCR產(chǎn)物的3'末端產(chǎn)生3'-dA overhangs，即產(chǎn)生帶一個(gè)A的3'粘端，可直接用于TA 克隆。

Ø 來源：本產(chǎn)品使用的Taq DNA polymerase為recombinant Taq DNA Polymerase，通過大腸桿菌表達(dá)純化獲得，和純化獲得的天然Taq DNA Polymerase在各方面的性質(zhì)相同。

Ø 用途：高背景和有非特異性條帶的PCR，高專一性PCR(high-specificity PCR)，高靈敏度PCR，生物芯片分析(microarray analysis)，常規(guī)PCR，克隆PCR、TA克隆等，不建議用于熒光定量PCR (qPCR)。

Ø 活性定義：One unit of the enzyme catalyzes the incorporation of 10 nmol of deoxyribonucleotides into a polynucleotide fraction (adsorbed on DE-81) in 30 min at 70ºC. Enzyme activity is assayed in the following mixture: 67 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25ºC), 6.7 mM MgCl2, 1 mM 2-mercaptoethanol, 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA, 0.75 mM activated calf thymus DNA, 0.2 mM of each dNTP, 0.4 MBq/ml 

Ø 純度：不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含RNA酶，滿足常規(guī)PCR反應(yīng)要求。

Ø 酶儲(chǔ)存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。

Ø 10X Hot-Start PCR Buffer：100 mM Tris-HCl (pH 8.8 at 25ºC), 500 mM KCl, 15mM MgCl2, 0.8% (v/v) Nonidet P40。

Ø 失活或抑制：酚氯仿抽提可以使Hot-Start Taq DNA Polymerase失活，加入脫氧膽酸鈉至0.06%，SDS至0.01%，或sarkosyl至0.02%均可以抑制Hot-Start Taq DNA Polymerase。

Ø 本產(chǎn)品用于50微升的PCR反應(yīng)體系，足夠用于800個(gè)反應(yīng)；用于20微升的PCR反應(yīng)體系，足夠用于2000個(gè)反應(yīng)。

保存條件：-20ºC保存。

注意事項(xiàng)：

Ø 由于PCR反應(yīng)非常靈敏可以擴(kuò)增目的基因序列超過1000萬倍，在使用Hot-Start Taq Polymerase時(shí)請(qǐng)注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對(duì)照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。

Ø Hot-Start Taq DNA polymerase在PCR過程中每循環(huán)的出錯(cuò)幾率約為2.2×10-5，對(duì)于大于1kb的DNA片段的克隆推薦使用出錯(cuò)幾率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、BeyoTaq DNA polymerase等。對(duì)于普通的PCR或RT-PCR定性檢測(cè)或定量檢測(cè)，Hot-Start Taq DNA polymerase是最佳選擇。

Ø 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

Ø 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明：

1. PCR反應(yīng)體系的設(shè)置：

a. 融解并混勻PCR反應(yīng)所需的各種溶液。將Hot-Start Taq DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒內(nèi)。

b. 參考下表在冰浴上設(shè)置PCR反應(yīng)體系(如果有多個(gè)類似的PCR反應(yīng)，可以先配制大體積的包含水、buffer、dNTP和Hot-Start Taq酶的混合物，然后分裝到各PCR反應(yīng)管內(nèi)。根據(jù)情況，有時(shí)混合物中可以包括引物)：

注意：

a.通常引物的終濃度為0.2μM時(shí)可獲得良好的檢測(cè)效果，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0μM范圍內(nèi)調(diào)整引物的終濃度。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可

 降低引物濃度。

b.對(duì)不同類型的模板在50µl反應(yīng)體積中推薦用量如下：哺乳動(dòng)物基因組DNA：0.1-1µg；大腸桿菌基因組DNA：10-100ng；質(zhì)粒DNA：0.1-10ng。過多的模板DNA容易導(dǎo)致非特異性PCR產(chǎn)物

c. 用移液器輕輕吹打混勻或輕微Vortex混勻，室溫離心數(shù)秒，使液體積聚于管底。

d. 如果所使用的PCR儀有熱蓋則省略本步驟。如果PCR儀沒有熱蓋，則在管內(nèi)滴入一滴礦物油(mineral oil，ST275)。

e. 把設(shè)置好的PCR反應(yīng)體系置于PCR儀上，開始PCR反應(yīng)。

2. PCR反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置可以參考如下示例：

STEP1(起始變性): 94ºC 3min

STEP2(變性): 94ºC 30sec STEP3(退火): 55ºC 30sec STEP4(延伸): 72ºC 1min

STEP5(循環(huán)): Go To STEP2 for 30 cycles STEP6(最終延伸): 72ºC 10min

STEP7(臨時(shí)保存): 4ºC forever

注意：

a. PCR反應(yīng)的設(shè)置需根據(jù)模板、引物、PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度和GC含量等條件的不同設(shè)定不同的PCR反應(yīng)條件包括溫度、時(shí)間和循環(huán)數(shù)等。

b. STEP4(延伸)的時(shí)間設(shè)置需根據(jù)PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度進(jìn)行設(shè)置，通常每kb產(chǎn)物的延伸時(shí)間為1分鐘。例如PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度為 1kb，則延伸時(shí)間可以設(shè)置為1分鐘，PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度為2kb，則延伸

時(shí)間可以設(shè)置為2分鐘，以此類推。

c. 對(duì)于初次進(jìn)行的PCR，為盡量確保可以擴(kuò)增出預(yù)期的PCR產(chǎn)物，可以把循環(huán)數(shù)設(shè)置為35。對(duì)于需進(jìn)行半定量反應(yīng)循環(huán)數(shù)一定要進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化，使PCR反應(yīng)沒有達(dá)到平臺(tái)期。