苯丙氨酸解氨酶(PAL)檢測試劑盒(苯丙氨酸微板法)
產(chǎn)品簡介：
苯丙氨酸解氨酶(L- phenylalanine ammonia-lyase，PAL)是催化直接脫掉L-苯丙氨酸上的氨而生成反式桂皮酸的酶，該酶多存在于高等植物、酵母、菌類可溶性部分物質(zhì)，是1961年J.Koukol在大麥中發(fā)現(xiàn)的，推測其分子量約為30萬，這是一個(gè)可把苯丙氨酸用于酚類化合物合成的酶。在組織中的活性可隨外界因素而發(fā)生顯著變化，用光照、病傷害、植物激素處理等會(huì)使活性顯著增加，在多數(shù)情況下在組織中活性增加時(shí)，酶發(fā)生失活作用，這時(shí)組織中具有活性酶的量很快就會(huì)減少，據(jù)認(rèn)為這種失活是與類蛋白質(zhì)物質(zhì)作用有關(guān)，測定細(xì)胞木質(zhì)素合成途徑中間代謝物及關(guān)鍵酶活性,可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理，為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
雅吉生物苯丙氨酸解氨酶(PAL)檢測試劑盒(苯丙氨酸微板法)檢測原理是以苯丙氨酸作為底物，在酶促反應(yīng)的最適條件下采用每隔一定時(shí)間測定產(chǎn)物生成量的方法，于酶標(biāo)儀290nm 處檢測吸光度，以吸光度變化所需酶量進(jìn)行計(jì)算，主要用于植物組織的裂解液或勻漿液、血清等樣品中內(nèi)源性的苯丙氨酸解氨酶活性,尤其適用于檢測水果中苯丙氨酸解氨酶活性。
該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成：
| 名稱 | 100T | Storage |
| 試劑(A):PAL Lysis Buffer | 250ml | 4℃避光 |
| 試劑(B):PAL Assay Buffer | 5ml | 4℃避光 |
| 試劑(C):PAL終止液 | 1.2ml | RT |
自備材料：
1、蒸餾水
2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管
3、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板
操作步驟(僅供參考)：
1、準(zhǔn)備樣品∶
①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，留取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。
②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。
③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液，如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿，4℃ 10000r/min離心15~20min，取上清液，-20℃凍存，用于苯丙氨酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙氨酸解氨酶，可以使用蒸餾水或PAL Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>
2、PAL加樣∶
取96孔板，按照下表設(shè)置對(duì)照孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并
注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置2平行孔，求平均值。
| 加入物（μl） | 對(duì)照孔 | 測定孔 |
| 蒸餾水 | 150 | 100 |
| 待測樣本 | 50 | 50 |
| PAL Assay Buffer | - | 50 |
3、PAL檢測︰
以對(duì)照孔為對(duì)照(調(diào)零)，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為 A測定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h，立即加入10μl PAL終止液終止反應(yīng)(備選方案)，以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。
注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟，可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對(duì)照孔為對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度。
計(jì)算:
PAL活性單位的定義︰在該實(shí)驗(yàn)條件下，每小時(shí)吸光度變化0.01所需酶量為一個(gè)活性單位。
組織樣品PAL(U)={(A測定1-A測定0)×VT}/(W×Vs×0.01×t)
液體樣品PAL(U)=(A測定1-A測定0)/(0.01×t)
式中:
A測定1=40℃孵育1h后測定孔的吸光度
A測定0=加入PAL Assay buffer后立即檢測的測定管吸光度
W=組織樣本的重量(g)
VT=提取酶液的總體積(ml)
Vs=測定時(shí)所用酶液體積(ml)
t=反應(yīng)時(shí)間(h)=1
注意事項(xiàng)∶
1、待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。
2、獲得上清液為PAL酶液，應(yīng)盡快檢測，亦可-20°℃保存。
3、如果沒有可測定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板，也可以使用紫外分光光度計(jì)和石英比色皿，但應(yīng)注意比色杯的最小檢測體積。
4、每次檢測指標(biāo)不宜過多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期:6個(gè)月有效，4℃運(yùn)輸，4℃保存。
